Negativ färgning grund, teknik, fördelar och nackdelar

den negativ färgning Det är en speciell färgmetod för att lyfta fram kapslarnas närvaro i vissa mikroorganismer - huvudsakligen Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae och Cryptococcus neoformans-, från kliniska prov eller rena kulturer.

Det direkta provet som vanligen används för att applicera negativ färgning är cerebrospinalvätskan. Denna teknik representerar ett snabbt alternativ för den förmodade diagnosen meningit, särskilt Cryptococcus neoformans.

På samma sätt kan denna fläck appliceras på sputum och sterila vätskor i allmänhet såväl som på stammar erhållna från unga rena kulturer. Denna teknik använder nigrosin eller kinesisk bläck för dess utförande; Därför är det en mycket enkel och ekonomisk metod att tillämpa som ger information om bra diagnostiska värde på kort tid.

På så sätt kan varje laboratorium utföra denna färg. Självfallet måste laboratoriet ha en kompetent personal som kan erkänna jästarna i Cryptococcus neoformans isolerade eller spirande och differentiera dem från leukocyter och artefakter som provet kan presentera.

index

• 1 Stiftelsen
• 2 Teknik
  • 2.1 Material
  • 2.2 Specifikationer för provtagning
  • 2.3 Genomförande av tekniken med direktprover
  • 2.4 Genomförande av tekniken med stammar från kultur
  • 2.5 Observation i ett mikroskop
• 3 fördelar
• 4 Nackdel
• 5 Tissufärgning med indisk färg
• 6 referenser

foundation

Nigrosin och indisk bläck verkar på ett liknande sätt; Därför kan någon av de två substanserna användas utbytbart.

Denna teknik kallas negativ färgning eftersom den verkar i strid med resten av färgteknikerna. I det här är det fortfarande obestämt den struktur som söks eller att du vill se; det vill säga mikroorganismerna.

Färgen är därför baserad på färgning av smörjbotten i en mörk färg. I detta scenario markeras de kapade strukturerna i ljus eller färglös färg.

I allmänhet observeras jästerna refringent, omgiven av en klar halo som motsvarar kapseln. Detta beror på att kinesisk bläck och nigrosin är ämnen som inte kan penetrera polysackariden som bildar kapseln av levande mikroorganismer.

Det är värt att notera att andra strukturer som kan vara närvarande i direktprovet, såsom leukocyter eller röda blodkroppar, inte tränger in.

Nu, om mikroorganismerna är döda, kan tinkturen penetrera inuti dem på ett sådant sätt att denna färgning också är användbar för att utvärdera mikroorganismernas livskraft.

teknik

material

nigrosin

Nigrosinen skylder sitt namn till den svarta färgen den har. Det är en syntetisk substans som erhålls genom uppvärmning av blandningen av organiska föreningar - såsom nitrobensin, anilin och anilinhydroklorid - med användning av en katalysator (järn eller koppar) i reaktionen..

Kinesisk bläck

Kinesisk bläck är en substans som används främst av asiater för att skriva, göra konstverk och monokromatisk målning. Det är väldigt populärt i den kinesiska kulturen.

Den erhålls från bläckfisk bläck blandad med pulveriserat kol, produkt av förbränning av små hartsartade träd.

Det är också möjligt att förbereda det från sot av förbränning av kolväten (vegetabiliska oljor) tillsammans med ett proteingelatin som ger den rätt konsistens för att förhindra utfällning av kolpartiklar.

Specifikationer för provtagning

- Behöver inte fasta.

- Provet av CSF, sputum eller steril vätska måste innehålla minst 1 ml volym och måste överföras till rumstemperatur vid laboratoriet omedelbart.

- CSF och sterila vätskeprover bör tas av en specialiserad läkare.

- Det kan också vara en ren kultur av en misstänkt stam kopplad till de ovan nämnda patogenerna.

Genomförande av tekniken med direkta prover

- Proverna måste centrifugeras, supernatanten kasseras och sedimentet tas.

- En droppe av det centrifugerade materialet (sediment) och en droppe kinesisk bläck eller nigrosin placeras på en ren glida..

- Den ska blandas väl och täckas med en täckglida, så att droppen spridas ut som en tunn film utan att överskrida kanterna.

- Därefter monteras preparatet i mikroskopet.

- Om preparatet är för mörkt kan det spädas ut med vatten.

Utförande av tekniken med stammar från kultur

- En mycket liten del av en ung grödan tas med en såningsnål och löses i en droppe kinesisk bläck som tidigare placerats på en ren glida.

- En täckglas placeras på toppen.

- Det observeras i mikroskopet vid 10X och sedan vid 40X.

Du kan också lösa upp en del av kolonin i destillerat vatten, och därifrån ta en droppe och blanda den med bläcket. På så sätt blir förberedelsen inte så tjock, att det är möjligt att observera strukturerna i isolation. Om det finns agglomerationer, kommer det inte att observeras bra.

En annan metod är följande:

- Placera en droppe av kulturen i suspension i ena änden av bilden.

- Placera en droppe nigrosin i samma ände och blanda.

- Förbättra provet med hjälp av en annan bild som om du gjorde ett hematologiskt smet.

- Låt torka och observera under mikroskopet.

Observation i ett mikroskop

Först måste du fokusera med 10X objektiv för att få en bred bild av fältet. Därefter bör du söka om det finns tydliga utrymmen; Om det finns, fokusera med 40X för att se detaljerna.

nytta

- Det är lätt att utföra.

- Det är en ekonomisk teknik.

- Denna metod kräver inte att smetet fixeras till värme eller kemikalier. Därför observeras mikroorganismer utan förvrängningar.

- Den färska beredningen behöver inte torkas, så det kan observeras omedelbart och genererar resultat snabbt.

nackdel

När de är färdiga, bör de färska förberedelserna observeras omedelbart. Om de får torka är det inte längre möjligt att observera dem och en ny.

Tissue färgning med indisk bläck

En annan funktion som kinesisk bläck kan uppfylla är i patologilaboratorierna. Detta appliceras på vävnadsprover som kirurgiskt avlägsnats för att markera marginalerna för tumörresektion.

Den markerade vävnaden sprutas med ättiksyra. Detta verkar som en mordant och förhindrar att bläcket kommer ifrån när vävnaden utsätts för rutinbehandling för biopsipreparatet.

Förfarandet består i att bada vävnaden i alkohol och xylen och sedan imbibbera i paraffinvax. Denna markering vägleder patologen när man observerar vävnaden, vilket indikerar var marginalen för kirurgisk resektion eller annan intressepunkt är.

referenser

1. "Nigrosin". Wikipedia, den fria encyklopedin. 11 jul 2017, 22:46 UTC. 6 jan 2019, 16:56: en.wikipedia.org
2. "Kinesisk bläck". Wikipedia, den fria encyklopedin. 1 okt 2018, 03:08 UTC. 6 jan 2019, 18:20: en.wikipedia.org/
3. Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macias J och medarbetare. (2006). Arbetstagare i den autonoma regionen Extremadura. Särskild dagordning Volym IV. Redaktionell MAD. Sevilla-Spanien, sid 211-212.
4. Silva M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006). Specialist laboratorie tekniker, av den galiciska hälso-och sjukvården (SERGAS). Ämnesspecifik volym 2. Redaktionell MAD. Sevilla-Spanien, sid 79-80.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Mikrobiologisk diagnos av Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Panamericana S.A Redaktionell