Stain by May Grünwald-Giemsa grund, teknik och användningsområden



den Maj Grünwald-Giemsa fläckar o Pappenheim är en differentialfärgsteknik som blandar reagenserna Giemsa och May Grünwald. Det används för differentiering av normala och abnorma blodceller i utpressningar av perifert blod och benmärg, liksom för färgning av histologiska sektioner och cytologiska prover.

Båda reagensen -Giemsa och May Grunwald fläck härledda från Romanowsky typ teknik är baserad på en kombination av sura och basiska färgämnen.

Giemsa förbättrade tekniken genom att stabilisera blandningen av eosin, metylenblå och dess derivat, med glycerol. I motsats till detta använder May Grünwald eosin och metylenblått, med användning av metanol som lösningsmedel. Denna strategiska kombination har gett utmärkta resultat.

Även när det gäller cellmorfologin observation verkar på samma sätt som Giemsa och Wright, förbättrar denna teknik ovanstående stämfärg parasiter som orsakar malaria, Chagas, leishmaniasis och trichomoniasis.

Dessutom har det visat sig vara en mycket användbar teknik för den cytologiska studien av spermievätska. Det har uppmärksammats inte bara genom att visa de morfologiska egenskaperna hos spermier, men också mycket effektivt skiljer leukocyter, epitelceller och spermatogenes.

index

  • 1 Stiftelsen
    • 1.1 Variety av färgämnen
  • 2 Teknik
    • 2.1 Material
    • 2.2 Koncentrerad färglösning maj Grünwald
    • 2.3 Koncentrerad Giemsa färgämne
    • 2.4 Framställning av buffertlösningen vid pH 7,2
    • 2,5 Blodstryk eller benmärgsfärgningsförfarande
    • 2.6 Utvidgad färgteknik av spermievätska
    • 2.7 Viktiga specifikationer
  • 3 användningsområden
    • 3.1 Vaginal cytologi
    • 3.2 Spermiprov
  • 4 referenser

foundation

Tekniken följer grunden för Romanowskys fläckar, i vilka syrafärgerna har selektiv affinitet för de cellulära baskomponenterna och de sura komponenterna attraherar de basiska färgämnena.

Förklaras på ett annat sätt har både cellstrukturer och färgämnen positiva eller negativa elektriska laddningar; lika avgifter avvisas och olika avgifter lockas.

Exempelvis laddas basiska färgämnen såsom metylenblått positivt och lockas av negativt laddade strukturer. Det är därför denna färgämne fläckar kärnor som är rika på DNA och RNA som har negativt laddade fosfatgrupper.

Granulerna av segmenterade basofiler och cytoplasmer av de mononukleära vita blodkropparna innehållande RNA färgas också.

På liknande sätt bär syrafärgen en negativ laddning, varför den förenar positivt laddade strukturer såsom erytrocyterna och granulerna i segmenterade eosinofiler. När det gäller granulerna i segmenterade neutrofiler fixar dessa båda färgämnena.

Olika färgämnen

I denna teknik samexisterar en kombination av reaktioner mellan färgämnen och metakromatiska ortocromáticos. Ortokromatik (eosin och metylenblå) binder till cellstrukturen som de är relaterade till och ger en stabil färg som inte varierar.

Istället, metakromatiska (derivat av metylenblått och azur A azure B), varierar sin ursprungliga färg när bunden till den specifika strukturen och kan även ha olika nyanser.

Slutligen krävs det steg som bärs av May Grünwald-lösningen närvaron av vatten, för utan det kommer färgen att penetrera strukturerna men kommer inte att fixeras. För att detta ska uppstå måste färgämnet bli polärt eller joniserat och kan således fälla ut och fästa vid besläktade strukturer.

teknik

material

- Diabilder för diabilder.

- Färgbroar.

- Lösning av May-Grünwald.

- Giemsa fläck.

- Destillerat vatten.

Koncentrerad färglösning maj Grünwald

Vi måste väga 0,25 g eosin-metylenblå (färgämne enligt May Grünwald) och lösa upp i 100 ml metanol. Blandningen blandas sedan i 1 timme och lämnas att vila i 24 timmar. Avslutade tiden, det filtrerar.

Att tillämpa tekniken att vara utspätt färgämne maj Grünwald följande: för 200 ml utspädd färgämne 30 ml av den koncentrerade lösningen mäts, 20 ml buffertlösning tillsätts och 150 ml destillerat vatten justerat till pH7.2-7.3 . Den blandas sedan och filtreras.

Koncentrerad Giemsa färgämne

De bör vägas 0,5 g azur eosin metylenblått (färgämne Giemsa), upplöst i 50 ml metanol och placera blandningen 50 ml glycerin.

För att utföra tekniken, späd 1:10 med buffertlösning och låt den vila i 10 minuter. Det kan filtreras om det behövs.

Framställning av buffertlösningen vid pH 7,2

De måste vägas:

- 40 mg kaliumdihydrogenfosfat (KH2PO4).

- 151 mg di-natriumvätefosfat 12-hydrat (Na2HPO4).

Båda föreningarna löses i 100 ml vatten.

Blodsprutning eller benmärgsfärgningsförfarande

Det finns två modaliteter: en klassiker och en snabb.

Klassiskt läge

  1. Täck utstrykningarna i 2 eller 3 minuter med utspädd maj-Grünwald-lösning.
  2. Tvätta med buffrad destillerat vatten för att eliminera den tidigare lösningen.
  3. Täck med samma buffrad tvättlösning och låt i 1 minut. Tanken är att föregående färgämne är fixerat till strukturerna och att cellerna samtidigt hydreras.
  4. Tillsätt 12 droppar utspädd Giemsa-tinktur på det buffrade vattnet och blås för att blanda och homogenisera. Låt stå i 15 eller 20 minuter.
  5. Tvätta utstrykningarna med buffrad destillerat vatten och placera det för att lufttorka.
  6. Fokusera och observera i ett optiskt mikroskop fläckar blodcellerna med 40X-objektivet. Om det behövs kan 100X användas.

Snabbläge

  1. Täck smeten med May Grünwald färgämne utspätt i 1 minut.
  2. Tvätta med buffrad destillerat vatten.
  3. Skydda med buffrat vatten och låt stå i 1 minut.
  4. Placera det utspädda Giemsa-färgämnet och lämna i 5 minuter.
  5. Tvätta med buffrad destillerat vatten och låt lufttorka.

De tekniker som beskrivs här är en orientering guide, men det bör noteras att de förfaranden och färgningstider varierar beroende på den kommersiella huset förbrukar reagens. Det är lämpligt att följa stegen som strikt anges av varje kommersiellt hus.

Spermiervätska förlängd färgteknik

1- Täck spridningen med ett tunt lager av maj Grünwald-lösning i 4 minuter.

2- Ta bort färgämnet och tvätta med destillerat vatten.

3- Placera ett lager utspädd Giemsa (1:10) i destillerat vatten i 15 minuter.

4- Ta bort färgämnet och tvätta med destillerat vatten.

5- Låt torka och observera under mikroskopet.

Viktiga specifikationer

Tekniken kräver reagens och tvättlösningar har ett pH justerat till 7,2 -7,3, så att färgämnesaffiniteterna hos cellstrukturer inte är förvrängda och varierar inte den slutliga färgen förväntas.

tillämpningar

Denna teknik används av kliniska laboratorier för att fläcka utstryk av perifert blod och benmärg, vävnadssnitt och cytologier.

I det hematologiska fältet är denna teknik av avgörande betydelse vid studier av abnormiteter hos celler i form av storlek, storlek och antal. Det är ett mycket värdefullt verktyg för diagnos av vissa sjukdomar, som leukemi och anemi.

Dessutom presenterar den ett enastående verktyg när man letar efter parasiter i de hematologiska fälten (Plasmodium sp och Trypanosoma cruzi) eller histologisk (Leishmanias sp).

Vaginal cytologi

Vad gäller vaginal cytologi är denna teknik särskilt fördelaktig för observation av Trichomonas vaginalis. Detta är ett viktigt resultat, eftersom dess närvaro simulerar karcinombilder in situ som sedan försvinner när parasiten elimineras.

Spermiprov

Det har varit ett idealiskt verktyg för studier av spermieprover, eftersom det ger värdefull information om kvaliteten på spermierna.

De data som är i huvudsak antalet och morfologi, samt åtföljande celler som kan vara närvarande och som är avgörande, som könsceller, leukocyter och epitelceller.

Med denna analys är det möjligt att beskriva abnormiteter som observerats i spermierna i huvudet, nacken, mitten och huvuddelen.

Dessutom kan de också hjälpa visa fall haemospermia (närvaro av röda celler i semen) och leucospermia eller piospermia (ökat antal leukocyter i sädesvätska).

referenser

  1. Costamagna S, Prado M. Validering av det fria testet, maj Grünwald-Giemsa och gramfärger och kulturmedia för diagnos av Trichomonas vaginalis. Parasitol. 2001; 25 (1-2): 60-64. Finns i: scielo.
  2. Merck KGaA laboratorium. Kan Grünwald eosin metylenblå för mikroskopi.
  3. "May-Grünwald-Giemsa fläck." Wikipedia, den fria encyklopedin. 15 nov 2018, 14:37 UTC. 8 jan 2019, 04:29: en.wikipedia.org
  4. Laboratorieglas Kemikalier Panreac. Reagens för histologiska tekniker, hematologi och mikrobiologi. Finns på: glasschemicals.com
  5. Retamales E, Manzo V. Rekommendation för färgning av blodutslag för att läsa blodtalet. Nationella och referensbiomedicinska laboratoriet. Institutet för folkhälsan i Chile.
  6. Sarabia L. Spermiogram enligt WHO-kriterierna. Program för anatomi och biologi av utveckling. Medicinska fakulteten University of Chile Finns på: pp.centramerica.com