Tetrathionatbuljongfundament, förberedelse och användning



den tetrationsbuljong eller TT-buljong är ett selektivt flytande odlingsmedium för berikning och återvinning av Salmonella-stammar. Det skapades av Müeller och senare modifierades av Kauffmann, därför finns det de som kallar det Müeller-Kauffmann buljong.

Det ursprungliga mediet innehöll proteosepeptoner, kalciumkarbonat och natriumtiosulfat. Kauffmann tillsatte gallsalter och skapade en annan modalitet med ljusgrön. Dessa substanser hämmar tillväxten av koliformer, vilket lämnar det fria mediet för utveckling av patogena bakterier, i detta fall salmonella.

Modifieringen var mycket framgångsrik eftersom det avsevärt ökade mediets känslighet. Därför är det för närvarande användbart för sökningen av Salmonella i någon typ av prov, men speciellt för fast eller flytande avföring och mat..

Dess förberedelse består av två faser; Det kommersiella mediet är en bas för framställning av tetrathionatbuljongen och sedan för att tetrationatet bildas tillsätts en joderad jodlösning för att slutföra mediet.

Den amerikanska Public Health Association (APHA) rekommenderar användning av tetrationat buljong kompletterad med ljus för att berika salmonella prover för grönt eftersom det är mer selektivt än tetrationate och selenit.

I allmänhet, är den tetrationate idealisk misstänks när närvaron av Salmonella-bakterier i små mängder eller misshandlas genom exponering för inhibitorer eller industriella processer som minimerar deras livskraft.

index

  • 1 Stiftelsen
  • 2 Framställning
    • 2.1 - tetrationat
    • 2.2 -Variante tetrathionatbuljong med ljusgrön
  • 3 Använd
  • 4 Kvalitetskontroll
  • 5 rekommendationer
  • 6 referenser

foundation

De föreliggande peptonerna motsvarar kaseinpankreatisk digestion och peptisk digestion av djurvävnad. Dessa ger källa till kol, kväve och näringsämnen i allmänhet för bakteriell tillväxt.

För sin del reagerar natriumtiosulfat med den joderade lösningen för att bilda tetrathionat. Detta hämmar tillväxten av koliforma bakterier och gynnar utvecklingen av bakterier innehållande reduktasenzymet tetrationat, innefattande släktet Salmonella är, men också Proteus.

Gallsalter verkar också som ett hämmande ämne av de flesta Gram-positiva bakterierna och vissa gramnegativa bakterier (koliformer).

Kalciumkarbonat absorberar de giftiga ämnen som genereras av nedbrytningen av tetrathionat, vilket bildar svavelsyra. I detta avseende neutraliserar kalciumkarbonat surheten, som upprätthåller pH hos det stabila mediet.

När det gäller den ljusgröna modaliteten ökar detta ämne den selektiva kraften av tetrathionatbuljongen genom att hämma andra mikroorganismer andra än släktet Salmonella..

beredning

-Tetrerat buljong

Jodjodlösning

Ånger:

  • 6 g jod.
  • 5 g kaliumjodid.

Kaliumjodiden löses i ca 5 ml sterilt destillerat vatten, sedan tillsättes iod lite efter en stund medan blandningen upphettas. Efter att den är helt upplöst fylls den med sterilt destillerat vatten tills det når en slutlig volym på 20 ml.

Halv bas för tetrathionatbuljong

Väg 46 gram av dehydratiserat medium och suspendera i 1 liter sterilt destillerat vatten. Blanda och värma tills det är helt löst, det kan koka i bara några minuter. Sterilisera inte i en autoklav. Medelens bas får svalna till ca 45 ° C och vid den tiden tillsättes 20 ml av den joderade lösningen..

Efter tillsats av lösningen bör iodurada till mediet användas omedelbart. Om du inte vill använda hela blandningen, fortsätt enligt följande:

10 ml av basmediet fördelas i rör och endast 0,2 ml av den joderade lösningen sättes till de som skall ympas med prov..

De som inte kommer att användas kan fortfarande lagras i kylskåp, men eftersom mediet inte steriliseras är idealet att förbereda den exakta mängden som behövs..

Färgen på mediet före tillsats av den joderade jodlösningen är mjölkvit med vit fällning och efter tillsats är den brun med en tät fällning. Den observerade fällningen är normal och motsvarar kalciumkarbonat som inte löser upp. Det slutliga pH-värdet i mediet är 8,4 ± 0,2.

-Tetrathionat buljongvariant med ljusgrön

Att förbereda tetrationate med ljust gröna alla steg som beskrivits ovan utförs, men dessutom tillsättas till blandningen 10 ml ljust grön lösning framställd 0,1%.

Ljusgrön

Denna lösning framställs enligt följande:

Väg 0,1 g ljusgrön och suspendera i 100 ml destillerat vatten. Värm tills kokan uppnår sin totala upplösning. Spara i gult flaska.

användning

För pallprover (pallkultur) är protokollet följande:

Inokulera 1 g fast avföring eller 1 ml flytande avföring i ett rör med 10 ml färdig användning av tetrathionatbuljong. Skaka kraftigt och inkubera i aerobiosis vid 43 ° C under 6-24 timmar.

Därefter en alikvot av 10 till 20 ul av buljongen och subodlades i ett selektivt medium för Salmonella, såsom SS-agar, XLD agar, briljantgrön agar, Hektoen enterisk agar, etc..

Parallellt bör selektiva medier för Salmonella inokuleras med direktprovet (avföring) utan anrikning. För prov av rektal swabs, ladda ner materialet som samlas in i röret och fortsätt som beskrivet ovan.

För livsmedelsprover väger 10 g fast mat eller 10 ml flytande mat och inokulerar en flaska med 100 ml färdig-till-användning tetrathionatbuljong. Fortsätt på samma sätt som beskrivits ovan men inkubera vid 37 ° C.

Som framgår är förhållandet mellan provet och buljongen alltid 1:10.

Kvalitetskontroll

För att testa odlingsmediet kan kända kontrollstammar användas. De vanligaste är ATCC-certifierade stammar.

De stammar som ska användas är Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 och Staphylococcus aureus ATCC 25923.

För Salmonella-stammar förväntas en utmärkt utveckling, medan Escherichia coli kan ha en svag eller regelbunden utveckling, och Gram-positiva stammar (Enterococcus och Staphylococcus) hämmas delvis eller helt.

rekommendationer

-Eftersom detta medium inte hämmar tillväxten av Proteus, använder vissa laboratorier 40 mg / liter novobiocin för att förhindra utvecklingen av denna mikrobiella stam. Antibiotikumet bör tillsättas före den jodiserade jodlösningen.

-Efter beredning av mediet inklusive den joderade jodlösningen borde det inte vara mer än 2 timmar efter ympningen.

-Vid tidpunkten för fördelning av mediet i rören måste blandningen homogeniseras kontinuerligt för att resuspendera den bildade fällningen.

-I mindre förorenade prover inkuberas tetrathionatbuljongen vid 35-37 ° C och i högt förorenade prov rekommenderas inkubering vid 43 ° C..

referenser

  1. Conda Pronadisa Laboratory. 2010. Tetrathionatbuljongbasen enligt Müeller-Kauffmann. Finns i:
  2. BD Laboratories 2003. Tetrathionatbuljongbas. Finns i:
  3. Laboratorier Britania. 2015. Tetionatbuljongbas. Finns i:
  4. Media BBL. 2005. Rörberedningar för odling av Salmonella-arter.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnos av Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Bor-Rosel M, fransk-Monsreal J. Jämförelse odlingsmedier natriumselenit och natriumtetrationat, inkuberades vid både 37 ° C och 42 ° C under isoleringen av Salmonella spp av bärstolar. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220