Urea buljong foundation, förberedelse och användningar

den urea buljong är ett flytande odlingsmedium, som används för att påvisa närvaron av enzymet ureas i vissa mikroorganismer. Ureas är ett mikrobiellt enzym som produceras konstitutivt, det vill säga det syntetiseras oberoende av huruvida substratet på vilket det verkar är närvarande.

Funktionen av ureas är relaterad till sönderdelning av organiska föreningar. Inte alla mikroorganismer kan syntetisera detta enzym, därför tillåter dess bestämning i laboratoriet att identifiera vissa bakteriestammar och till och med differentiera mellan arter av samma släkt..

Det finns två typer av ureattest: Stuart och Christensen. De skiljer sig åt i deras sammansättning och känslighet. Den första är speciell för att visa en stor mängd ureas som produceras av arten av släktet Proteus.

Den andra är mer känslig och kan detektera små mängder av ureas sent som genereras av andra bakteriella, såsom Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus, och Helicobacter släktena Mycobacterium.

Stuart buljong karbamid innefattar karbamid, natriumklorid, dikaliumfosfat, monokaliumfosfat, jästextrakt, fenolrött och destillerat vatten.

Medan, buljongen eller Christensens karbamid agar består av pepton, natriumklorid, monokaliumfosfat, glukos, urea, fenolrött, destillerat vatten och agar. Den senare endast om det är det fasta mediet.

index

• 1 Stiftelsen
  • 1,1 Stuart urea buljong
  • 1,2 Christensen buljong eller agar urea
  • 1.3 Tolkning av båda medierna (Stuart och Christensen)
• 2 Framställning
  • 2,1 Stuart urea buljong
  • 2.2 Christensen buljong eller agar urea
• 3 användningsområden
• 4 Såning av ureattestet
• 5 Kvalitetskontroll
• 6 referenser

foundation

Enzym ureasen hydrolyserar urea för att bilda koldioxid, vatten och två ammoniakmolekyler. Dessa föreningar reagerar för att bilda den slutliga produkten som kallas ammoniumkarbonat.

Stuart urea buljong

Stuart-ureabuljongen buffras mer med ett pH av 6,8. Därför måste mikroorganismen kunna bilda stora mängder ammonium för att bli röd till fenol. PH måste stiga över 8.

Därför urea buljong är selektiv för Stuart Proteus, vilket gav positiva resultat i 24 till 48 timmar av inkubation, och är inte effektiva för bakterier som producerar låga mängder av ureas eller långsamt hydrolyserar karbamid.

Detta beror på att Proteus-arter kan använda urea som kvävekälla. Däremot behöver andra ureasproducerande bakterier en ytterligare källa.

Pérez et al. (2002) bestämt att ureabuljong Stuart var lika effektiv som Christensens karbamid agar för att bestämma ureas i jäststammar av släktena Candida, Cryptococcus, Rhodotorula, Trichosporon och Saccharomyces.

Författarna till studien hävdar att de har uppnått 100% sammanträffande med båda medierna (Stuart och Christensen) genom inkubering i 24 och 48 timmar; förutsatt att de tog så positiva på stammarna som lyckades göra media till en stark rosa-fuchsia-färg.

Denna förtydligande är nödvändig, eftersom Lodder (1970) bekräftade att nästan alla jästar lyckas placera skarv av ureasagar av Christensen till blekrosa. Detta beror på att de kan hydrolysera urea i minimala mängder och till bildningen av aminer genom oxidativ dekarboxylering av aminosyrorna på ytan. Detta bör inte tolkas som positivt.

Buljong eller urea agar från Christensen

Christensen ureabuljong eller agar är mindre buffrad och kan detektera små mängder ammonium. Dessutom är detta medium berikat med peptoner och glukos. Dessa föreningar orsakar andra ureasproducerande mikroorganismer som inte växer i Stuart-buljongen för att utvecklas.

På samma sätt erbjuder Christensen urea test snabbare resultat, speciellt för Proteus, att kunna ge starkt positiv på så lite som 30 minuter som minimaltid och upp till 6 timmar som maximal tid.

Resten av ureasproducerande mikroorganismer uppnå färg halv sväng svagt efter 6 timmar, och starkt vid 24, 48, 72 timmar eller mer, och även vissa stammar kan ge svaga reaktioner efter 5 eller 6 dagar.

Tolkning av båda medierna (Stuart och Christensen)

Mediet är ursprungligen gul-orange i färg och en positiv reaktion kommer att vända mediet till rosa-fuchsia. Färgens intensitet är direkt proportionell mot den mängd ammonium som produceras.

En negativ reaktion lämnar mediet av den ursprungliga färgen med undantag för jästarna, vilket kan ge en blekrosa med Christensen urea agar.

beredning

Stuart urea buljong

Väg det nödvändiga gramet enligt indikationerna på det kommersiella huset. Lös upp i företrädesvis sterilt destillerat vatten. Använd inte värme för att lösa upp, eftersom urea är känslig för värme.

Membranfiltreringsmetoden användes för sterilisering. För detta användes ett Millipore-filter med porer med en diameter av 0,45 ^ i diameter. Använd inte en autoklav. När lösningen är filtrerad fördelas den i sterila rör. För att uppnå tillförlitliga resultat måste det överföras mellan 1,5 ml som minsta kvantitet till 3 ml som maximal mängd per rör..

Förvaras i kylskåp och temperament före användning.

Om filtreringsmetoden inte är tillgänglig ska mediet användas omedelbart för att uppnå tillförlitliga resultat.

Ett annat sätt att förbereda urea Stuart buljong är som följer:

Vissa kommersiella hus säljer den halva basen för ureatestet, inte inklusive urea.

Mängden som anges av kommersiella huset vägs. Den löses i destillerat vatten och steriliseras i autoklaven vid 121 ° C i 15 minuter. Låt det vila lite och när mediet är varmt tillsätt 100 ml av en lösning av urea beredd till 20% och steriliseras genom filtrering.

Den fördelas i sterila rör, som tidigare beskrivits.

Buljong eller urea agar från Christensen

-Framställning av karbamidlösningen

Väg 29 gram dehydratiserad urea och lös upp i 100 ml destillerat vatten. Använd filtreringsmetoden för att sterilisera. Autoklavera inte.

-Urea bas agar

Upplös 24 g av dehydratiserad basagar i 950 ml destillerat vatten. Sterilisera i autoklaven vid 121 ° C i 15 minuter. Låt stå tills den når en temperatur på 50 ° C och tillsätt den tidigare beredda urean aseptiskt.

Häll 4 till 5 ml i sterila rör och lut tills det stelnar. Det ska finnas en lång flöjt topp.

Detta medium kan också framställas i flytande form.

tillämpningar

Urea-testet är extremt effektivt för att skilja Proteus-släktet från andra släktingar från Enterobacteriaceae-familjen, med tanke på den snabba reaktion som tillhandahålls av Proteus.

Om Christensens sammansättning används, hjälper testet att skilja mellan arter av samma släkt. Till exempel, S. hemolyticus och S. warneri spå staphylococcus koagulas-negativ och betahemolytisk, men de skiljer sig åt det S. hemolyticus det är negativt urea och S. warneri det är positivt urea.

Å andra sidan använde McNulty framgångsrikt 2% Christensen ureabuljong för att studera närvaron av Helicobacter pylori i prover av biopsier som tagits från magslemhinnan (antralområdet).

Närvaron av H. pylori det framgår av ett positivt ureatest. Varaktigheten för att observera resultaten är direkt proportionell mot mängden närvarande mikroorganismer.

Som det kan ses är det en enkel metod för diagnos av Helicobacter pylori i gastriska biopsier.

Slutligen är detta test också användbart för att skilja arter av släktet Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus och Mycobacteria.

Såning av ureatprovet

De två metoderna kräver ett starkt mikrobiellt inokulum för att optimera resultaten. Bakteriella kolonier tas företrädesvis från blodagar och Sabouraud-agarjästar, med några undantag. Inokulatet emulgeras i det flytande mediet.

För Stuart ureabuljongen inkuberades vid 37 ° C i 24 till 48 timmar, med vetande att man bara söker stammar av släktet Proteus när stammen är en bakterie. För jäst kan den inkuberas vid 37 ° C eller vid rumstemperatur i 24 till 48 timmars inkubation.

I fallet med Christensen urea-buljong inkuberas vid 37 ° C i 24 timmar. Om testet är negativt kan det inkuberas i upp till 6 dagar. Om testet är positivt före 6 timmar indikerar det att det är en stam av släktet Proteus.

När det gäller Christensen urea agar, är agarskärningen ympad kraftigt, utan punktering. Buljongen inkuberas och tolkas på samma sätt.

Kvalitetskontroll

Kontrollstammar kan användas för att testa mediet, t.ex. Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae  ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 och Salmonella typhimurium.  De två första måste ge positiva resultat och de två sista negativa resultaten.

referenser

1. Pérez C, Goitía K., Mata S, Hartung C, Colella M, Reyes H. et al. Användning av Stuart ureabuljong för ureasprovet, som ett test vid diagnos av jäst. Rev. Soc. Ven. Microbiol. 2002; 22 (2): 136-140. Finns på: Scielo.org.
2. Mac Faddin J. (2003). Biokemiska tester för identifiering av bakterier av klinisk betydelse. Tredje ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires Argentina.
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnos av Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
5. Laboratorier Britania. Christensen Medio (Urea agarbas) 2015. Tillgänglig på: britanialab.com