Soja buljong tripticaseína foundation, förberedelse och användningar
den sojabuljong tripticaseína Det är ett flytande odlingsmedium, väldigt näringsrikt och icke-selektivt. På grund av sin stora mångsidighet är det ett av de mest använda flytande odlingsmedierna i mikrobiologilaboratoriet.
Det är också känt som buljong tripticasa soja eller smält kasein-soja, vars förkortning är TSB för dess akronym på engelska Tryptic är jag Buljong eller CST för dess akronym på spanska. Dess användningsområden är mycket varierade på grund av dess sammansättning. Den består av triptein, sojapepton, natriumklorid, dikaliumfosfat och glukos.
Det kan reproducera kliniskt viktiga patogena bakterier, inklusive de som är näringskrävande och anaeroba bakterier. Vissa opportunistiska svampar och föroreningar kan också utvecklas i denna miljö.
På grund av sin höga näringsförmåga har den hög känslighet för att detektera mikrobiell förorening, varför den valts av USDA Animal and Plant Health Inspection Service för mikrobiologisk analys av vacciner..
På samma sätt uppfyller tripticas sojasoppa kraven i de olika farmakopéerna (europeisk EP, Japanska JP och nordamerikanska USP) för den mikrobiologiska undersökningen av produkter på industriell nivå, såsom kosmetika och mat.
Å andra sidan är det värt att nämna att trots sitt stora nytta är detta medium relativt billigt, så det är överkomligt för de flesta mikrobiologilaboratorier. Det är också mycket lätt att förbereda.
index
- 1 Stiftelsen
- 2 Framställning
- 2,1 Trypticamin sojabönor
- 2.2 -varianter av tripticasein sojabuljong
- 3 Använd
- 4 utsäde
- 5 Kvalitetskontroll
- 6 begränsningar
- 7 referenser
foundation
Triptinen, peptonen och glukosen ger honom de väsentliga näringsrika egenskaperna för att göra den till ett idealiskt medium för en snabb mikrobiell utveckling.
Cirka 6 till 8 timmars inkubation kan redan ses tillväxt i de flesta mikroorganismer. Det finns emellertid långsamt växande stammar som kan pågå för dagar att växa.
Natriumklorid och dikaliumfosfat fungerar som osmotisk jämvikt respektive pH-regulator. Närvaron av tillväxten framgår av uppkomsten av grumlighet i mediet; Om det inte finns någon tillväxt förblir mediet genomskinligt.
På grund av sin ljusa färg är det möjligt att observera produktionen av pigment, såsom den som visas i bilden i början av artikeln, vilket motsvarar pigmentet som produceras av Pseudomonas aeruginosa.
beredning
-Tryptisk sojabönsbuljong
För att framställa tripticas sojabotan väger 30 gram av det dehydratiserade kommersiella mediet på digital skala. Därefter löses det upp i en liter destillerat vatten i en fiola.
Blandningen får stå i 5 minuter och bringas därefter till en värmekälla för att hjälpa till vid upplösningen av mediet. Det ska skakas ofta under kokning i 1 minut.
När den är upplöst fördelas den i rör av lämplig storlek efter behov. Rör med bomullsplugg eller bakelitlock kan användas. Därefter steriliseras rören med mediet i autoklaven vid 121 ° C i 15 minuter.
Mediet pH bör vara 7,3 ± 0,2
Det bör beaktas att färgen på det dehydrerade odlingsmediet är ljust beige och bör förvaras vid 10 till 35 ° C på en torr plats. Medan den beredda buljongen är ljusgult och bör förvaras i kylskåp (2 till 8 ° C).
-Varianter av tripticasein sojabuljong
Tryptikaminmodifierad sojabjörk kan framställas genom tillsats av gallsalter och novobiocin för att göra det selektivt för isolering av E. coli. Ett annat alternativ för samma ändamål är att förbereda tripticas sojbuljong kompletterad med vancomycin, cefixim och tellurit (2,5 μg / ml).
Å andra sidan kan mer glukos (0,25%) tillsättas till trypticasein sojabotans när målet är att stimulera biofilmbildning.
användning
Det är näringsrikt nog att tillåta tillväxt av krävande eller irriterande bakterier som Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp och Brucella sp, Inget behov av att komplettera med blod eller serum.
På samma sätt kan vissa svampar utvecklas i denna buljong, såsom Candida albicans komplex, Aspergillus sp och Histoplasmakapselatum.
Dessutom är detta medium under anaeroba förhållanden idealiskt för att återvinna bakterier som tillhör Clostridium-släktet, såväl som anaeroba, icke-sporulerade bakterier av klinisk betydelse..
Om tillsats kan 6,5% natriumklorid användas för tillväxt av Enterococcus och andra Grupp D Streptococcus.
På forskarnivå har det varit mycket användbart i olika protokoll, särskilt i studien av bakterier som bildar biofilmer eller biofilmer. Det används också för att bereda bakteriesuspensionen vid 0,5% av Mac Farland som är nödvändig för att utföra antibiogrammet enligt metoden för Kirby och Bauer.
I detta fall tas 3 till 5 kolonier med liknande utseende och emulgeras i 4-5 ml trypticaseinsoppa. Den inkuberas sedan i 2 till 6 timmar vid 35-37 ° C och justeras därefter till önskad koncentration med användning av steril saltlösning. Tryptikas sojbuljonger bör inte användas i inkubation 18-24 timmar.
planterade
Provet kan sådas direkt eller subkultureras rena kolonier som tas från selektiva medier. Inokulatet ska vara liten för att inte molna mediet före inkubation.
Inkuberar normalt vid 37 ° C i aerobios i 24 timmar, men dessa betingelser kan variera beroende på vilken mikroorganism man söker. Den kan också inkuberas under anaeroba förhållanden vid 37 ° C i flera dagar om det behövs. Till exempel kan krävande eller långsamt växande mikroorganismer inkuberas upp till 7 dagar.
I den mikrobiologiska analysen av farmaceutiska substanser, som vacciner, är protokollen strängare. I dessa fall kasseras buljongen utan tillväxt tills den når 14 dagar kontinuerlig inkubation.
Kvalitetskontroll
För varje tillverkat sats bör 1 eller 2 rör inkuberas utan ympning för att visa sterilitet. Det måste förbli oförändrat.
Du kan också plantera kända stammar för att utvärdera deras beteende. Bland de stammar som kan användas är:
Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 eller 25923, Escherichia coli ATCC 8739, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 14028.
I alla fall måste tillväxten vara tillfredsställande under betingelserna för atmosfär och temperatur som är lämplig för varje mikroorganism.
begränsningar
-Fermenteringen av glukos orsakar minskningen av mediumets pH genom produktion av syror. Detta kan vara ogynnsamt för överlevnaden av vissa mikroorganismer som är känsliga för surhet.
-Det rekommenderas inte för underhåll av stammar, eftersom bakterierna efter några dagar utplånar näringsämnena med följd av ackumulering av giftiga ämnen som gör miljön ogiltig.
-Försiktighet måste vidtas i vården av alla sterilitetsprotokoll, eftersom buljongerna lätt smittas.
-Efter beredning av tripticasein försöker sojabocker inte överföra buljong till ett annat sterilt rör, eftersom denna typ av manövrer är mycket sårbar mot förorening.
referenser
- Cona E. Villkor för en bra mottagningsstudie med agar diffusionstest. Rev. chil. infectol. 2002; 19 (2): 77-81. Finns på: scielo.org
- British Laboratory Tryfin soja buljong. 2015. Finns på: britanialab.com
- MCD Laboratory. Trytica soy buljong. Finns på: electronic-systems.com
- Neogen laboratorium. Sojabotten Triptych. Finns på: foodafety.neogen.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnos av Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
- Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Utvärdering av tekniken för magnetisk immunoseparation för återvinning av Escherichia coli O157: H7 i mjölk krämer. ALAN. 2006; 56 (3): 257-264. Finns på: scielo.org.ve
- Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Biofilmsbildning i isolerade Staphylococcus aureus enligt antimikrobiell känslighet och klinisk ursprung. Vitae. 2015; 62 (1): 1-8. Finns på: saber.ucv.ve
- Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Isolering av Escherichia coli O157: H7 i pall Prover av dubbelt ändamål Nötkreatur från Miranda Municipality, Zulia State, Venezuela. Rev. Cient. (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239-245. Finns på: scielo.org