Vogel-Johnson Agar grund, förberedelse och användning

den Vogel-Johnson agar är ett fast, selektivt och differentiellt odlingsmedium, speciellt formulerat för isolering av Staphylococcus aureus. Detta medium skapades av Vogel och Johnson 1960 från modifieringen av glycintelurit agar formulerad 1955 av Zebovitz, Evans och Niven.

Modifieringen bestod i att öka koncentrationen av mannitol närvarande i mediet och vid införlivandet av en pH-indikator. Den aktuella formeln är sammansatt av tryptikas jästextrakt, mannitol, dikaliumfosfat, litiumklorid, glycin, fenolrött, agar, kaliumtellurit lösning 1% och vatten.

Det bör noteras att det finns andra medel som, som Vogel-Johnson agar, är selektiva för isolering av S. aureus, såsom saltad mannitolagar och Baird Parker-agar. I detta avseende kan man säga att grunden för Vogel-Johnson agar är en blandning mellan salt mannitolagar och Baird Parker-agar..

I den första kolonierna av S. aureus De skiljer sig genom att fermentera mannitol och vrida pH-indikatorn till gult. Å andra sidan, i den andra S. aureus det karakteriseras genom att minska tellurit till tellur och bildar grå till svarta kolonier. Båda egenskaperna observeras i Vogel-Johnson-agar.

Detta medium, som dess motsvarigheter, är användbart för detektering av Staphylococcus aureus i livsmedelsprover, sanitära kontroller av industriprodukter och i kliniska prover.

index

• 1 Stiftelsen
  • 1.1 Bidrag av näringsämnen
  • 1.2 Selektiv effekt
  • 1.3 Differentialkraft
  • 1.4 Osmotisk balans och solidifieringsmedel
• 2 Framställning
  • 2,1 1% vikt / volym kaliumtelluritlösning
  • 2,2 Vogel-Johnson agarbasmedium
• 3 Använd
• 4 Kvalitetskontroll
• 5 referenser

foundation

Bidrag av näringsämnen

Vogel-Johnson-mediumet innehåller triptein- och jästextrakt; båda substanserna ger långkedjiga aminosyror som tjänar som kol- och kvävekällor som är nödvändiga för bakteriell tillväxt. Bakterier som kan växa i detta medium tar näringsämnen från dessa ämnen.

Selektiv kraft

Agar Vogel - Johnson kan hämma tillväxten av gramnegativa bakterier och även en del grampositiva, främja utvecklingen av koagulaspositiva stafylokocker. De hämmande ämnena är kaliumtitturit, litiumklorid och glycin.

Differentialkraft

De substanser som gör detta differentialmedium är mannitol och kaliumtellurit. Mannitol är en kolhydrat, och när jästa syror som gör den mittre från rött till gult sker, vilket sker tack vare närvaron av pH-indikatorn fenolrött.

Samtidigt tar den färglösa telluriten när den reduceras till metallfri tellurid, en mörkgrå till svart färg.

den Staphylococcus aureus ferment mannitol och reducerar tellurit till tellurium. Det är därför de typiska kolonierna av S. aureus i detta medium är de grå eller svart omgiven av ett gult medium.

Bakterier växer i detta medium och inte minska tellurit eller jäsa mannitol, formen ännu mer intensiv än den ursprungliga färgen genomskinliga kolonier omgivna av ett medium röd på grund av alkalisering av mediet genom användning av peptoner.

Dessutom, de bakterier som reducerar tellurit men inte fermenterar mannitol växa som gråa eller svarta kolonier omgivna av ett medium djupröd.

Om mediet framställdes utan tillsats av kaliumtitturit, kolonierna av S. aureus de skulle utvecklas som gula kolonier, omgivna av ett gult medium, såsom i salt mannitolagar.

Osmotisk balans och stelningsmedel

Dik Kaliumfosfat upprätthåller den osmotiska balansen i mediet och justerar pH till neutralitet 7.2. Medan agaren ger solid konsistens till odlingsmediet.

beredning

1% kaliumtelluritlösning m / v

Denna lösning ingår ej i det dehydratiserade mediet eftersom det inte kan steriliseras i en autoklav. Av denna anledning framställs det separat och sättes till det steriliserade mediet.

Vissa kommersiella hus säljer färdig att använda 1% kalium tellurit lösning. Om du vill förbereda i laboratoriet, fortsätt enligt följande:

Väg 1,0 g kalium tellurit och mäta 100 ml destillerat vatten. Lös kalciumets tellurit i en del av vatten och slutför sedan mängden vatten tills du når 100 ml. Sterilisera lösningen genom filtreringsmetod.

Vogel-Johnson agarbasmedium

Väg 60 g av dehydratiserat medium och lös upp i 1 liter destillerat vatten. Blandningen upphettas till kokning för att hjälpa till vid fullständig upplösning. Under upplösningsprocessen omröres mediet ofta.

Sterilisera i en autoklav vid 15 pund tryck och 121 ° C i 15 minuter. Avlägsna från autoklaven och låt stå tills mediet når en temperatur av cirka 45 till 50 ° C. Tillsätt 20 ml av den tidigare beredda kaliumtelluritlösningen till 1%.

Blanda och häll i sterila petriskålar. Låt solidisera och beställa inverterad i plaquers för senare lagring i kylskåpet tills användning.

Det slutliga pH-värdet i det framställda mediet bör vara vid 7,2 ± 0,2.

Innan du planterar ett prov, vänta tills plattan tar omgivningstemperaturen.

Färgen på det beredda mediet är rött.

användning

Även om det kan användas för isolering av S. aureus I någon typ av prover används den mest för mikrobiologisk analys av läkemedel, kosmetika och mat.

Det rekommenderas att inokulatet är tätt. Sädning kan utföras genom striering med platinhandtag eller vid yta med Drigalski spatel.

Plattorna inkuberas vid 35-37 ° C i 24 till 48 timmar i aerobios.

Kvalitetskontroll

För att utföra kvalitetskontrollen av Vogel-Johnson-mediumet kan följande kontrollstammar användas:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 eller Proteus mirabilis ATCC 43071.

Det förväntade resultatet är följande: för stammarna av S. aureus Tillfredsställande tillväxt med svarta kolonier omgiven av gult medium. till S. epidermidis regelbunden tillväxt med genomskinliga eller svarta kolonier omgivna av röd medium.

På samma sätt för E. coli Det förväntas att det kommer att finnas total hämning och för Proteus mirabilis partiell eller total hämning; om den växer kommer det att göra så sparsamt och kolonierna blir svarta omgivna av en medelstark röd färg.

referenser

1. BD Laboratories. VJ (Vogel och Johnson Agar). 2006. Tillgänglig på: bd.com
2. Laboratorier Britania. Vogel-Johnson Agar. 2015. Finns på: britanialab.com
3. Laboratorier Britania. Kalium tellurit. 2015. Tillgänglig på: britania.com
4. Himedia Laboratory. Vogel-Johnson Agar Medium. 2018. Finns på: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
5. Vogel-Johnson Agar Base. Merck Microbiology Manual. 12: e upplagan, s. 502-503. Finns i: Användare / Team / Nedladdningar
6. Bidragsgivare av Wikipédia, "Ágar Vogel Jonhson", Wikipédia till encyklopedisk livre,   disponível em: wikipedia.org.
7. Venezuelansk standardförening 1292-89. (1989). Mat. Isolering och räkning Staphylococcus aureus. Finns i:sencamer.gob.ve