Ljusgrön agarfundament, förberedelse och användning

den ljusgrön agar det är ett fast odlingsmedium med en hög grad av selektivitet. Det används uteslutande för isolering av stammar av släktet Salmonella, men det finns några undantag, såsom typhi och paratyphi-arter som inte växer i detta medium.

Sökandet av släktet Salmonella är vanligt i prover av avföring, vatten eller mat. I detta avseende kan detta medium vara mycket användbart. Denna agar skapades 1925 av Kristensen, Lester och Jurgens, senare modifierad av Kauffmann.

Den består av pluripeptonas från peptisk uppslutning av djurvävnad och pankreas smälta kasein innehåller också jästextrakt, natriumklorid, laktos, sackaros, fenolrött, briljantgrön agar.

Den kännetecknas av att vara en ganska hård miljö för de flesta bakterier, främja tillväxten av Salmonella, koliforma bakterier men vissa kan överleva i det, utvecklas svagt.

Det är viktigt att betona att i detta medium växer inte Shigella-släktet och inte heller Salmonella typhimurium, eller Salmonella paratyphi. Därför, om det är önskvärt att isolera dessa mikroorganismer, bör andra medel användas, såsom bland annat XLD-agar..

index

• 1 Stiftelsen
  • 1.1 Ljusgrön agar
  • 1.2 Varianter av ljusgrön agar (BGA)
• 2 Framställning
• 3 Användningar / applikationer
• 4 Kvalitetskontroll
• 5 referenser

foundation

Ljusgrön agar

Var och en av de komponenter som utgör mediet har en specifik funktion som bestämmer agarens egenskaper och egenskaper.

Pluripeptonerna och extraktet av jäst är källan till näringsämnen från vilka mikroorganismerna tar kväve och mineraler som är nödvändiga för deras utveckling. Laktos och sackaros är energikällor för mikroorganismer som kan fermentera dem.

Den ljusgröna är den hämmande substansen som förhindrar utvecklingen av Gram-positiva bakterier och ett stort antal gramnegativa mikroorganismer.

Natriumklorid ger osmotisk stabilitet i mediet. Medan fenolröd är indikatorn för pH, blir den färg när detekterar produktionen av syror från fermentering av kolhydrater.

De icke-fermenterade kolonierna av laktos och sackaros växer i detta medium av en vit färg, rosa eller transparent, på en röd bakgrund. Till exempel bakterier av släktet Salmonella.

Medan fermenterings laktos eller sackaros som kan växa på detta medium, kolonierna utveckla grönaktig eller gulaktig grön gul, på en gul-grön bakgrund. Till exempel, Escherichia coli och Klebsiella pneumoniae.

Varianter av ljusgrön agar (BGA)

Det finns andra varianter av ljusgrön agar; novobiocin grön agar ljus glukos (NBG) och novobiocin agar ljusgrön glycerol laktos (NBGL).

Novobiocin agar ljusgrön glukos (NBG)

Tryptikas soja-agar innehållande jämammoniumcitrat, natriumtiosulfatpentahydrat, fenolrött, glukos, briljantgrönt, novobiocin och destillerat vatten.

Ser till isolering av Salmonella kolonier från pallprover.

I detta fall är ljusgrön och novobiocin de hämmande substanserna som förhindrar tillväxten av Gram-positiva bakterier och några gramnegativa mikroorganismer.

Natriumtiosulfat är källan till svavel och ferricitrat är källan av järn, både nödvändiga för att avslöja produktionen av vätesulfid genom bildningen av en svart fällning av järn sulfid.

Glukos är det fermenterbara kolhydratet och fenolröd är pH-indikatorn.

På detta medium utvecklas Salmonella-kolonierna stora med ett svart centrum omgivet av en rödaktig halo och följt av en tydlig synlig yta. Några stammar av Citrobacter freundii producera kolonier identiska med salmonella.

Ljusgrön novobiocinagar-glycerollaktos (NBGL)

Detta medium innehåller tryptikassojaagar, jämammoniumcitrat, natriumtiosulfat, laktos, glycerol, briljantgrönt, novobiocin och destillerat vatten.

Skillnaden i detta medium med den föregående är att glukos ersätts med laktos och glycerol och fenolröd används inte.

Mediet används också för att isolera Salmonella-arter, kolonierna utvecklas svarta, genom framställning av vätesulfid.

Endast kolonier som inte producerar syra från glycerol eller laktos uppnår en H-produktion₂Det räcker, eftersom det låga pH-värdet stör bildandet av H₂S. Detta resulterar i färglösa kolonier för de flesta Proteus- och Citrobacter-arter.

beredning

-Väg 58 gram av det kommersiellt erhållna dehydrerade mediet. Tillsätt den i en liter dubbeldestillerat vatten. Blanda, låt stå några minuter och skicka preparatet till en värmekälla tills det löser sig helt.

-Autoklav vid 121 ° C i 15 minuter, överskrid inte steriliseringstiden.

-Låt stå och servera även varm i sterila petriskålar. Det slutliga pH-värdet bör vara 6,9 ± 0,2.

-Låt solidisera och förvara i kylskåp tills användning. Innan plantering ska plattorna ta rumstemperatur.

-Pulvermediet är grönt och klart att ta en orangebrun eller rödgrön färg, beroende på pH och kommersiella huset. En mycket brun färg indikerar att agaren överhettades.

-När agar är stelnat rekommenderas det inte att omarbetas, eftersom mediet försämras.

Användningar / applikationer

Detta medium används för att söka stammar av släktet Salmonella från avföringsprover och bland annat mejeriprodukter..

Eftersom det är en ganska oskadlig miljö är det lämpligt att plantera ett rikligt inokulum om det direkta provet används. Annars bör föranrikning och berikning av proverna utföras före plantering i detta medium.

Eftersom vissa stammar av salmonella hämmas eller växer med svårighet, är det lämpligt att följa detta medium med andra selektiva agar för salmonella.

All koloni med karakteristisk Salmonella måste utsättas för biokemiska tester för definitiv identifiering.

Kvalitetskontroll

För att testa det ljusa grönagarmediumets goda funktion kan ATCC-stammar användas för att observera utvecklingen av densamma på den..

De vanligaste stammarna som används för kvalitetskontroll är: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922,  Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538.

De första 3 måste ge rosa eller genomskinliga vita kolonier på en röd bakgrund. Salmonella med god utveckling och Proteus med gles eller regelbunden tillväxt.

Klebsiella och Escherichia förväntas gulgul kolonier med gul bakgrund och i fallet med Shigella och Staphylococcus bör hämmas.

Det dehydratiserade mediet bör förvaras vid rumstemperatur, på ett torrt ställe, eftersom mediet är mycket hygroskopiskt.

referenser

1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratory S.A. Brilliant Green Agar. 2009
2. British Laboratory Ljusgrön agar. 2015.
3. BD Laboratory. BD Brilliant Green Agar. 2013.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. (5: e upplagan). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Mikrobiologisk diagnos av Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Panamericana S.A Redaktionell