Agar TSI-grund, förberedelse och användning



den TSI-agar eller järn trippel sockeragar är ett fast odlingsmedium som tjänar som ett biokemiskt test för att styra den initiala identifieringen av gramnegativa baciller. Den är baserad på att bevisa jäsningen av de närvarande sockerarterna och produktionen av vätesulfid och gas.

Dess sammansättning och fundament är mycket lik Klyler-järnprovet, med skillnaden att den senare innehåller endast glukos och laktos. I stället, som namnet antyder, innehåller trippeljärnjärn tre fermenterbara kolhydrater: glukos, laktos och sackaros..

Dessutom har TSI-mediet fyra proteinderivat som gör det till en mycket näringsrik agar: jästextrakt, köttekstrakt, pepton och proteosepepton. Den innehåller också järn ammoniumsulfat, natriumtiosulfat, natriumklorid, fenolrött och agar.

Oförmågan hos en mikroorganism att fermentera glukosen som är närvarande i mediet utesluter omedelbart att den hör till familjen Enterobacteriaceae. Detta test är därför avgörande för att bestämma vilken identifieringsväg som ska vidtas för att bestämma släktet och arten.

Varje laboratorium bestämmer om det fungerar med TSI agar eller Kligler agar agar.

index

  • 1 Stiftelsen
    • 1.1 Natriumklorid och agar
    • 1,2 pH-indikator (fenolröd)
    • 1.3 Proteinderivat (jästextrakt, köttxtrakt, pepton och proteosepepton)
    • 1.4 Fermentering av kolhydrater (glukos, laktos och sackaros)
    • 1.5 Gasproduktion
    • 1,6 Natriumtiosulfat och järn ammoniumsulfat (produktion av vätesulfid)
  • 2 Framställning
  • 3 användningsområden
  • 4 utsäde
  • 5 begränsningar
  • 6 referenser

foundation

Var och en av föreningarna uppfyller en funktion inom mediet.

Natriumklorid och agar

Natriumklorid är nödvändigt för att bibehålla den osmotiska jämvikten i mediet. Medan agaren ger den fasta konsistensen.

PH-indikator (fenolröd)

PH i det beredda mediet är balanserat till 7,3 och pH-indikatorn (fenolröd) blir gul under 6,8. Detta innebär att små mängder syra som produceras genom jäsning av socker, kommer att vända mediet från röda-orange till gult.

Om jäsning inte uppstår kommer alkalinering av mediet genom användning av peptonerna, från röd-orange till starkt rött.

Proteinderivat (jästextrakt, köttxtrakt, pepton och proteosepepton)

När bakterierna metaboliserar de proteiner som finns närvarande i TSI-agaren, produceras aminer som alkaliserar mediet (huvudsakligen på avkanten) eftersom reaktionen behöver syre. Aminerna vrider inramningen till starkt rött.

Men detta beror på bakteriernas förmåga att fermentera kolhydrater eller ej.

Fermentering av kolhydrater (glukos, laktos och sackaros)

Studien av jäsning av socker kan ge flera bilder och var och en tolkas annorlunda. Tolkningen av testet delar mikroorganismerna i tre kategorier: fermentorer utan glukos, icke-laktos fermentorer och laktos / sackaros fermentorer.

Observera att mängden glukos i mediet är begränsad, medan koncentrationen av laktos och sackaros är 10 gånger högre.

Bakterierna i familjen Enterobacteriaceae och andra glukos-fermenterande mikroorganismer börjar börja jäsa detta socker eftersom det är det enklaste kolhydratet för energi..

Å andra sidan är laktos och sackaros komplexa kolhydrater som måste brytas ner och omvandlas till glukos så att de kan komma in i Embden-Meyerhof-cykeln.

-Icke-fermenterande glukosmikroorganismer

När den inokulerade mikroorganismen inte kan fermentera glukos kan mycket mindre jästa andra kolhydrater. Därför bildas syror inte här, men det finns amindannelse i avfarten på grund av användningen av peptoner.

I det här fallet vrids skottet till en starkare röd och rörets botten kan förbli oförändrad eller kan också alkaliseras, vilket ger hela röda röret.

Tolkning: K / K betyder alkalisk fasning / alkalisk eller neutral bakgrund

På bilden som finns i början av artikeln, se bilden av rör D.

Detta resultat indikerar att mikroorganismen inte hör till familjen Enterobacteriaceae.

-Icke-fermenterande mikroorganismer av laktos / sackaros

Om bakterierna kan fermentera glukos men inte laktos eller sackaros kommer följande att inträffa:

Bakterien kommer att förbruka allt glukos närvarande efter ca 6 till 8 timmar, att kunna surgöra både avfasningen och tacoen; det vill säga, agaren har blivit helt gul. Men när glukos är utarmad och oförmåga att använda laktos och sackaros, kommer bakterierna att börja metabolism av proteiner.

Denna reaktion behöver syre, därför uppträder nedbrytningen av peptonerna på ytan (avfasning). De framställda aminerna alkaliserar inredningen genom att ge gul till röd. Denna reaktion bevisas vid inkubering 18-24 timmar.

Tolkning: K / A betyder alkalisk fas och syra taco.

På bilden som finns i början av artikeln, se bilden av röret B.

-Laktos / sackaros fermenterande mikroorganismer

Mikroorganismerna jäser laktos och sackaros kan naturligtvis jäsa glukos. Efter minimi mängden glukos närvarande i mediet är utarmat, pyruvat bildas börjar att metabolisera att bilda syror genom aerob Krebs cykel, och perioden av 8 till 12 timmar hela mediet är gul.

Om bakterierna kan splittra laktos eller sackaros, fortsätter syrorna att produceras och efter 18-24 timmar kommer hela röret - näbb och taco att förbli gult.

Det bör noteras att användningen av glukos görs på två sätt: en i aerob form i rörets avfasning och den andra anaerobt i botten av röret.

Tolkning: A / A betyder syravinkel / syra botten. Det kan presentera gas eller ej.

På bilden som finns i början av artikeln, se bilden av röret A.

Gasproduktion

Vissa mikroorganismer kan producera gas under fermentering av sockerarter. Gasen är bevisad i röret genom det tryck som det utövar inuti agar. Trycket orsakar bildandet av bubblor eller agarförskjutningen. Ibland kan gasbildning bryta mediet.

Det är viktigt att vid tidpunkten för sådd av TSI-mediet görs punkteringen rent av centrum av agaren tills den når botten. Om punkteringen avleds mot rörets väggar kan det orsaka falska positiva effekter vid gasproduktionen, eftersom den kommer att fly genom den felaktigt bildade kanalen.

Gasproduktion och de reaktioner som sker i infattningen agar, behöver syre, därför rekommenderas att röret är ansluten med bomullspropp och om bakelit locket används bör detta inte ställas in helt.

Gasproduktionen redovisas som positiv (+) eller negativ (-).

Natriumtiosulfat och järn ammoniumsulfat (produktion av vätesulfid)

Bakterier som kan producera vätesulfid (färglös gas) tar svavel av natriumtiosulfat närvarande i mediet. När H är formad2S reagerar med järn ammoniumsulfat, vilket ger järnsulfid (svart fällning klart synlig).

Produktionen av H2S rapporteras som positiv (+) eller negativ (-).

På bilden som finns i början av artikeln, se bilden av röret C.

beredning

Väg 62,5 g av dehydratiserad trippelsocker (TSI) agar och lös upp i en liter destillerat vatten.

Värm tills agar är helt upplöst. Koka i en minut omgående omrörning. Fördela 4 ml av mediet i 13/100 provrör med bomullslock.

Sterilisera i en autoklav vid 121 ° C i 15 minuter. Ta bort från autoklaven och låt vila på ett lutande sätt. Man måste ta hand om att både basen och höljet har samma avstånd.

Förvaras i kylskåp 2-8 ° C. Låt temperamentet före plantering av bakteriestammen.

Färgen på det dehydratiserade mediet är lätt beige och det beredda mediet är rödorange

Det slutliga pH-värdet för det framställda mediet är 7,3 ± 0,2.

tillämpningar

TSI-testet används allmänt vid mikrobiologilaboratoriet. Detta test är viktigt för att styra den typ av test som måste tillämpas för att komma fram till identifieringen av släktet och arten. Dess bra utförande och tolkning kan spara material och arbete.

Om resultatet är en TSI K / K och cytokromoxidas testet är positivt, är det känt att tester för att identifiera icke-fermentorer såsom Pseudomonas, Alcaligenes, Achromobacter, Burkholderia gramnegativa baciller, bland andra genrer bör användas. Om negativt oxidas är inriktad kön Acinetobacter, Stenotrophomonas, etc..

Men om du får en TSI A / A eller K / A och cytokromoxidas testet är negativt, ytterligare minska nitrater till nitriter, har visshet om att det är en mikroorganism som tillhör familjen Enterobacteriaceae. I det här fallet kommer identifieringsvägen att inriktas på specifika tester för denna grupp av bakterier.

Dessutom, om en K / A eller A / A bilden och cytokrom testet oxidas är positivt erhålles, ytterligare tester för att rida kommer att syftar till att identifiera jäsande stammar som inte tillhör familjen Enterobacteriaceae, såsom Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio och Pasteurella.

En TSI med vätesulfid, negativt oxidas, kommer att styra identifieringen av följande släkting av Enterobacteriaceae-familjen: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella eller Salmonella.

En TSD med knapp eller måttlig vätesulfid i den alkaliska fasan med en alkalisk botten och ett positivt oxidas kommer att styra användningen av test för identifiering av gramnegativa, icke-fermenterande baciller som producerar H2S, såsom Shewanella putrefaciens.

Slutligen kan TSD användas för undersökning av produktionen av vätesulfid i gram-positiva baciller, speciellt när det misstänks Erysipelothrix rhusiopathiae.

planterade

TSI-mediumet måste ympas med rena kolonier, isolerade i primära eller selektiva kulturer. Om kolonin tas från selektivt medium som utsädes med prov med blandad flora, bör man ta hand om att ta endast ytan, eftersom det kan finnas livskraftiga stammar i det nedre delen av kolonin.

Därför bör slingan aldrig kylas i ett selektivt medium för att sedan ta kolonin och inokulera ett TSI-medium.

Planteringen kommer att göras med en rak loop eller nål. En punktering kommer att göras, se till att den är genom mitten av mitten tills den når botten, och sedan är planteringen färdig att yta ytan på ett zigzag sätt. Gör inte två punkteringar.

Inkubera vid 37 ° C i aerobios i 18-24 timmar. Tolka vid denna tid, varken före eller efter.

begränsningar

TSI-testet bör läsas mellan 18-24 timmar inkubation. En läsning före denna tid kan ge en falsk positiv av jäsning A / A. En läsning efter denna tid kan ge upphov till en falsk negativ bild av icke-fermentor på grund av konsumtionen av peptoner som alkaliserar mediet.

referenser

  1. Mac Faddin J. (2003). Biokemiska tester för identifiering av bakterier av klinisk betydelse. Tredje ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnos av Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  4. "TSI-agar". Wikipedia, den fria encyklopedin. 10 juli 2018, 08:09 UTC. 10 feb 2019, 03:33 Tillgänglig på: en.wikipedia.org
  5. Laboratorier Britania. TSI-agar (trippel sockerjärnagar). 2015. Finns på: britanialab.com
  6. BD Laboratories Trippel sockerjärnagar (TSI-agar). 2003. Tillgänglig på: bd.com