Agar Thayer Martin grund, förberedelse och användning



den Thayer Martin agar Det är ett mycket näringsrikt och selektivt fast medium för isolering av Neisseria meningitidis och Neisseria gonorrhoeae; båda kända som patogena eller kliniskt viktiga Neisseria.

En av de viktigaste speciella egenskaperna hos Thayer Martin agar är dess höga innehåll av näringstillskott. Denna egenskap är oumbärlig, eftersom Neisserias är mycket krävande mikroorganismer ur näringssynpunkt och växer därför inte i vanliga medier.

Dessutom, eftersom dessa mikroorganismer finns vanligen i icke-sterila områden lägga inhibitorer för att förhindra tillväxt av en annan flora är det nödvändigt, utan att påverka utvecklingen av släktet Neisseria.

Denna agar består av GC basaragar, hemoglobin, ytterligare näringstillskott och ett komplex av hämmande ämnen (antibiotika och antifungaler). Kommersiella hus säljer varje tillägg separat.

Provet som ska planteras i detta medium beror på den mikroorganism som eftersträvas. till Neisseria gonorrhoeae De ideala proverna är vaginala och uretriska sekretioner. Medan för Neisseria meningitidis De mest använda proverna är CSF, pharyngeal och nasopharyngeal exudates.

index

  • 1 Stiftelsen
    • 1,1 GC basaragar
    • 1,2 hemoglobin
    • 1.3 Anrikningstillägg
    • 1,4 inhibitorer
  • 2 Framställning
    • 2.1 Original Thayer Martin Agar
    • 2.2 Agar Thayer Martin modifierad
  • 3 Använd
  • 4 Kvalitetskontroll
  • 5 begränsningar
  • 6 referenser

foundation

Neisserierna är mikroorganismer klassificerade som störande och därför är deras isolering svår. Av denna anledning är Thayer Martín ett komplext medium och var och en av dess komponenter uppfyller en funktion som förklaras nedan:

GC-kärnagar

GC-agar innehåller proteospepton, majsstärkelse, natriumklorid, dikaliumfosfat, monokaliumfosfat och agar-agar. Dess komponenter tillhandahåller de grundläggande näringsämnena för mikrobiell utveckling, neutraliserar giftiga fettsyror, bidrar till att upprätthålla osmotisk balans, definiera pH och ge solid konsistens till miljön.

hemoglobin

Hemoglobin ger faktorerna V och X (nikotinamid adenindinukleotid NAD respektive hemin). Därför växer i denna miljö även haemophilusarter. Hemoglobin kan erhållas kommersiellt i dehydrerad form eller färskt defibrinerat bovint blod kan sättas till mediet.

Anrikningstillägg

Dessutom kommer den genomsnittliga Thayer-Martin också addera ett tillägg anrikning, eftersom de näringsämnen som innehåller agar basen är ej tillräcklig för kraven av släktet Neisseria.

Det vanligaste anrikningstillägget kallas isovitalex. Detta innehåller glutamin, adenin, NAD, Cocarboxylase, guanin, ferrinitrat, p-aminobensoesyra, vitamin B12, tiamin och glukos. Alla dessa föreningar är nödvändiga för en korrekt utveckling av patogena Neisseria.

inhibitorer

Eftersom det är ett mycket näringsrikt medium måste inhibitorer användas för att förhindra tillväxten av mikroorganismer av den vanliga floran i området och därigenom gynna isoleringen av släktet Neisseria..

Hämmarkomplexet är sammansatt av vancomycin, kolistin och nystatin. Vancomycin hämmar tillväxten av grampositiva bakterier, förhindrar kolistin utvecklingen av gramnegativa bakterier såsom Pseudomonas och några saprofytiska Neisseria och Nystatin verkar på jäst som Candida albicans.

Däremot modifierades Thayer Martin agar; ändringarna bestod i tillsats av trimetoprim, ökningen av mängden agar och tillsatsen av extra glukos. Dessa förändringar förbättrade avsevärt återhämtningen av arter av Neisseria gonorrhoeae.

Det bör noteras att trimetoprim hämmar tillväxten av Proteus-släktet och dess konsekventa formning av svärmande. I detta avseende är antibiotika det som ger den selektiva naturen till mediet Thayer Martin.

beredning

Original Thayer Martin Agar

-GC-agar

Väg 8,2 g av dehydratiserat GC-medium och suspendera i 100 ml. Blanda och koka i 1 minut med frekvent omrörning för att lösa upp i sin helhet. Sterilisera blandningen i en autoklav vid 121 ° C i 15 minuter.

-2% hemoglobin

Suspensionera 2 g av dehydratiserat hemoglobin i 2 eller 3 ml varmt destillerat vatten för att bilda en likformig blandning. Lägg lite till lite mer vatten för att slutföra en volym på 100 ml. Suspensionen måste vara homogen före sterilisering.

Sterilisera i autoklav i 15 minuter.

-Anrikningstillägg

Rekonstituera den kommersiella vägen med det spädningsmedel som tillhandahålls av samma kommersiella hus. Blanda väl. Mängden spädmedel som ska användas kommer att anges i instruktionerna för satsen..

-Hämningstillägg V.C.N (vankomycin, kolistin, nystatin)

Reconstitute injektionsflaskan med det spädningsmedel som tillhandahålls av kommersiella huset. Blanda väl. Mängden spädmedel som ska användas kommer att anges i instruktionerna för satsen..

-framställd

För varje 100 ml GC-agar fortsätt enligt följande:

När den lämnar autoklaven GC-agar, låt svalna till en temperatur av 50 ° C och tillsats av 2 ml av hemoglobinlösningen framställd, Supplement 2 ml anrikning (isobitalex eller britalex), och 2 ml av tillägg hämning. Blanda och servera i sterila petriskålar.

Låt solidisera och förvara i kylskåp tills användning.

Färgen på det beredda mediet är körsbärrött. Det slutliga pH-värdet i mediet är 7,2 ± 0,2

Modifierad Thayer Martin Agar

Väg 8,2 g av dehydratiserat GC-medium och suspendera i 100 ml. Tillsätt 1 g agar och tillsätt 0,3 g glukos. Blanda och koka i 1 minut med frekvent omrörning för att lösa upp i sin helhet. Sterilisera blandningen i en autoklav vid 121 ° C i 15 minuter.

Förbered hemoglobin och berikningstillägg som beskrivet ovan.

Det använda hämmande tillskottet är V.C.N.T (vankomycin, kolistin, nystatin, trimetoprim).

-framställd

Fortsätt som beskrivet för den ursprungliga Thayer Martin agar.

användning

Thayer Martin agar bör tempereras innan man sår proverna. De vanligt använda proven är pharyngeal exudates, nasal exudates, vaginal, urethral och / eller rektal sekretion och CSF..

Använd färskt tagna prover och gör stark inocula på agar. Proverna såddas direkt genom materialutmatning och avlägsnas sedan genom uttömning på ytan.

Plattor inkuberas vid 35-37 ° C i 24 till 48 timmar i mikroerofil burk (5% CO2). Vid slutet av inkubationsperioden undersöks plattorna för små, grå och ibland mucoidliknande kolonier..

Utför Gram och bekräftande biokemiska tester till misstänkta kolonier.

Kvalitetskontroll

För att utföra kvalitetskontrollen av Thayer Martin-agar kan följande mikrobiella stammar användas.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 och Neisseria meningitidis ATCC 13090; i båda stammarna förväntas en tillfredsställande utveckling.

Följande stammar bör också inkluderas: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 och Candida albicans ATCC 10231. I alla dessa förväntas en total eller partiell inhibering i detta medium.

begränsningar

-Man måste komma ihåg att bakterier som är resistenta mot de använda hämmarna kan växa i mediet..

-Det finns stammar av Neisseria gonorrhoeae vilket kan vara känsligt för koncentrationen av vancomycin som används. Av denna anledning rekommenderas att chokladagar används, kompletterat med isovitalex parallellt men utan hämmare.

-Det finns stammar av jästresistenta mot nystatin som kan växa i detta medium och störa isoleringen av patogena Neisseria, särskilt gonokocker..

referenser

  1. Valtek diagnostiska laboratorier. Agar Thayer-Martin.2016. Finns i: com
  2. Laboratorier Britania. Thayer Martin Modified Medium. 2010. Tillgänglig på: britanialab.com
  3. Wikipedia bidragsgivare. Thayer-Martin agar. Wikipedia, den fria encyklopedin. 26 oktober 2017, 16:33 UTC. Finns på: wikipedia.org4. Åtkomst den 28 februari 2019.
  4. Laboratorier Britania. GC agar. 2010. Tillgänglig på: britanialab.com.
  5. Laboratorier BBL ™ Medium Enrichment for Fastidious Microorganisms. 1999. Finns i: bd.com
  6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnos av Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.