Agar TCBS grund, förberedelse och användning



den TCBS agar är ett starkt selektivt och differentiellt fast odlingsmedium, som används för isolering och odling av Vibrio-bakterier, särskilt Vibrio cholerae, V. vulnificus och V. parahaemolyticus som stora patogener i detta släkt.

Akronymet TCBS betyder tiosulfatcitratgallsackaros. Denna agar är också känd som det selektiva mediet för Vibrios. Den ursprungliga formeln skapades av Nakanishi och senare modifierad av Kobayashi.

Den består av jästextrakt, kött pepton, tryptikas, natriumcitrat, natrium-tiosulfat, oxgalla, sackaros, natriumklorid, ferricitrat, bromtymolblått, tymolblått och agar.

Denna komposition möjliggör en adekvat utveckling av Vibrio-arterna från vatten, avföring och matprover; med undantag för Vibrio hollisae, det växer inte i detta medium. Dessutom kan TCBS-mediet inhibera tillväxten av andra medföljande bakterier, speciellt koliformer.

På grund av de svåra gastrointestinala och extra-tarmproblemen som vissa arter av släktet Vibrio producerar är deras diagnos väldigt viktigt. Människan är smittad främst av konsumtionen av rå eller underkokt havsmat eller förorenat vatten, men även genom smitta av sår.

På grund av detta bör kliniska laboratorier inkludera TCBS-agar i studien av pallkulturer av flytande pallprover, särskilt med utseendet av risvatten. Speciellt om patienten rapporterar att ha haft kontakt med havsvatten eller har konsumerat fisk och skaldjur.

index

  • 1 Stiftelsen
  • 2 Framställning
  • 3 Använd
  • 4 utsäde
  • 5 Begränsning
  • 6 Kvalitetskontroll
  • 7 referenser

foundation

Jästextrakt, köttpeptoner och triptein är den näringsrika källan till detta medium. TCBS-agar är emellertid ett oönskat medium för de flesta bakterier.

Dess höga selektivitet ges genom tillsats av natriumcitrat och oxgall; båda är hämmande medel som också ger ett alkaliskt pH till mediet, begränsar tillväxten av den åtföljande floran och gynnar tillväxten av V. cholerae, bland andra arter. Det bör noteras att Vibrio cholerae är mycket känslig för halsbränna.

För sin del balanserar natriumklorid osmotiskt till mediet. Dessutom, eftersom dess koncentration är hög, verkar den också som ett hämmande medel, vilket gynnar tillväxten av halofila bakterier.

Sackaros är det fermenterbara sockret som tillsammans med de blå pH-indikatorerna för bromtymol och tymolblått ger skillnadskaraktären för mediet. Av detta skäl betyder det med detta att man kan differentiera sackaros fermenteringsstammar från icke-fermenterande stammar.

Kolonierna av sackaros fermenteringsstammar utvecklar en gul färg och kommer att vända mediet från grönt till gult på grund av syrans produktion. De icke-fermentorerna växer genomskinliga och mediet förblir den ursprungliga färgen (grön).

På samma sätt innehåller detta medium natriumtiosulfat som en källa till svavel och ferrikitrat som ett avslöjande medel. Båda visar bakterierna som kan producera vätesulfid (färglös gas). H2S bildas från tiosulfatet och senare reagera med ferriscitrat bildas en synlig svart fällning.

Slutligen är agar vad som ger den fasta konsistensen till mediet.

beredning

Väg 89 g av det dehydratiserade mediet och lös upp i en liter destillerat vatten. Hjälpa upplösning genom uppvärmning och frekvent omröring. Blandningen kan kokas i 2 minuter.

Detta medium autoklaverar inte. Efter upplösningen serveras den direkt på sterila plattor. Att stelna är anordnade i plaqueros inverterade och förvaras i kylskåp (2-8 ° C) fram till användning.

Mediet efter beredning bör ligga vid pH 8,6 ± 0,2.

Färgen på det dehydratiserade mediet är ljust beige eller grönaktigt, och mediet är färgat skogsgrönt eller blågrönt.

Det är viktigt att låta plattorna härda innan proven sår.

användning

Det vanligaste provet för isolering av Vibrios är diarré avföring.

Avföringsprover om de inte kan utsädes omedelbart på det selektiva mediet, måste transporteras i mitten av Cary Blair.

För att öka känsligheten hos kulturen kan fecesen passera genom peptonvatten vid pH 8,4 som ett berikningsmedium i maximalt 8 timmar, därifrån subkultiveras det till TCBS-mediet..

Man måste också komma ihåg att vissa stammar av Vibrios kan orsaka septikemi hos immunsupprimerade patienter, så att de kan isoleras från blodkulturer. På samma sätt kan prov av vatten och mat från havet analyseras när det finns epidemiska utbrott av kolersjukdom.

planterade

Inokulatet i provet som studeras måste vara framträdande, såningen utförs med hjälp av metoden att stridera genom utmattning. Plattorna inkuberas vid 37 ° C i 24 timmar i aerobios.

De presumtiva kolonierna av Vibrio cholerae De är medelstora, smidiga, ogenomskinliga, med tunna kanter och gul eftersom de fermenterar sackaros..

På liknande sätt, arten av V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii och några V. vulnificus. Andra arter av Vibrios kliniskt viktiga som V. parahaemolyticus Gera inte sackaros, utvecklas som olivgröna kolonier.

Dessutom måste man komma ihåg att vissa stammar av Aeromonas och Plesiomonas är oxidas (+) kan växa på detta medium, utveckla gula kolonier som kan förvirra klinikern. Medan vissa stammar av Pseudomonas också oxideras (+) som gröna kolonier såväl som V. parahaemolyticus.

begränsning

Oxidasprovet som är positivt för släktet Vibrio bör aldrig utföras från kolonier erhållna från TCBS-agar, eftersom det erhållna resultatet kommer att vara en falsk negativ. Föreningarna i mediet stör starkt i detta test. Därför bör det göras från subkulturer på blodagar.

Kvalitetskontroll

För att bevisa att mediet är i gott skick är det lämpligt att plantera kända eller certifierade kontrollstammar och observera om tillväxten uppfyller de förväntade egenskaperna.

För detta, stammar av:

-Vibrio cholerae - Tillfredsställande tillväxt (gula kolonier, genomskinlig gräns).

-Vibrio parahaemolyticus - Tillfredsställande tillväxt (koloni med grönt centrum och genomskinlig gräns).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - tillfredsställande tillväxt (gula kolonier med halor av samma färg runt kolonin).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - total eller partiell inhibering (små gula eller genomskinliga kolonier).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853- partiell eller total hämning (blå kolonier).

-Escherichia coli ATCC 25922 - Helt inhiberat.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Total eller partiell inhibering. (Små kolonier centrum grön genomskinlig kant).

Inkubation av ett oinokerat medium bör inte förändras.

referenser

  1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. TCBS agar. 2009. Tillgänglig på: f-soria.es
  2. BD Laboratory. BD. TCBS Agar 2003. Tillgänglig på: bd.com
  3. Laboratorier Britania. TCBS Medium. 2015. Finns på: britanialab.com
  4. Acumedia Laboratories TCBS Agar. 2016. Finns på: foodafety.neogen.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnos av Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan. Editorial Panamericana S.A. Argentina.