Soja agar tripticaseína grund, förberedelse och användning

den trypticasein soja agar eller tryptikas sojagar är ett fast, icke-selektivt och näringsrikt odlingsmedium. Den är betecknad med bokstäverna TSA för dess akronym i engelska Trypticase Soy Agar. Den består av triptein, sojapepton, natriumklorid och agar-agar.

På grund av sin höga näringskraft är den idealisk för odling av måttligt krävande och icke krävande mikroorganismer. Mediet utan extra tillskott rekommenderas inte för primära kulturer, men det är mycket användbart för subkultivering av rena stammar och håller dem livskraftiga, bland annat användningar.

Denna agar tjänar också som bas för beredning av berikade medier, såsom blodagar, speciellt när det är nödvändigt att observera mönster av hemolys och att montera taxan av optokin och bacitracin, som krävs vid diagnos av Streptococcus pneumoniae och Streptococcus pyogenes respektive.

Å andra sidan är det i kombination med antibiotika lämpligt att isolera fakultativa och strikta anaeroba mikroorganismer av klinisk betydelse från prover med blandad flora..

Slutligen uppfyller kompositionen av tripticaseinsyaragar och dess prestanda de krav som fastställts av de olika farmakopéerna (europeiska, japanska och nordamerikanska).

index

• 1 Stiftelsen
• 2 Framställning
  • 2.1 Tripticasein soja agarplattor
  • 2.2 Tripticasein soja agarplattor kompletterade med blod
  • 2.3 Tripticasein soja agarplattor kompletterade med uppvärmt blod
  • 2,4 kilar av tripticasein soja agar
• 3 användningsområden
• 4 utsäde
• 5 Kvalitetskontroll
  • 5.1 Sterilitetskontroll
  • 5.2 Tillväxtkontroll
  • 5.3 Kontroll av tillväxt och mönster av hemolys av tripticasin soja agar kompletterad med blod
• 6 referenser

foundation

För en korrekt utveckling av bakterier är det nödvändigt att närvaro av energibidrag, såsom aminosyror, vitaminer, purinbaser och pyrimidiska.

I detta avseende ger triptein och sojapepton dessa näringsämnen till mikroorganismer, vilket möjliggör deras fulla utveckling. För krävande bakterier är det emellertid nödvändigt att komplettera denna agar med defibrinerat blod eller uppvärmt blod för att öka dess anrikning.

Å andra sidan, om antibiotika tillsätts till mediet blir det ett selektivt medium. Du kan också lägga till 0,6% jästextrakt för att gynna isoleringen av arten av släktet Listeria, under tillsättning av cystint Tellurit och Lammblod är idealiskt för Corynebacterium diphteriae.

Slutligen ger natriumklorid den osmotiska balansen till mediet och agar ger den fasta konsistensen.

beredning

Tripticasein soyagarplattor

För att framställa trypticasein soyagar bör 40 gram av det dehydratiserade kommersiella mediet vägas i digital skala. Löses i en liter destillerat vatten i en fiola.

Blandningen får stå i 5 minuter och bringas därefter till en värmekälla för att hjälpa till vid upplösningen av mediet. Det bör omröras ofta och lämnas för att koka i 1 eller 2 minuter. Därefter steriliseras mediet i autoklaven vid 121 ° C i 15 minuter.

Låt svalna till 50 ° C och fördela i sterila petriskålar. Låt stelna, invertera, beställa i plaquers och förvara i kylskåp.

Det slutliga pH-värdet i mediet bör vara 7,3 ± 0,2.

Det bör beaktas att färgen på det dehydratiserade odlingsmediet är ljust beige och bör förvaras mellan 10 och 35 ° C, på ett torrt ställe.

För sin del är den framställda agar ljusgult. Förberedda plattor ska förvaras i kylskåp (2 till 8 ° C) tills användning.

Plattorna måste nå rumstemperatur innan de används.

Tripticasein soja agarplattor kompletterade med blod

Blodagar framställes genom tillsats av 5% defibrinerat blod vid tiden för kylning av trypticaseinsyaragar vid 50 ° C. Blandningen homogeniseras genom att rotera med mjuka rörelser.

Servera i de sterila petriskålarna. Färgen på mediet ska vara körsbärrött.

Tripticasein soja agarplattor kompletterade med uppvärmt blod

För att förbereda den TSA-baserade blodagaren är de förfaranden som beskrivs ovan densamma, men när de lämnar autoklaven får den stå kvar tills medietemperaturen är ungefär mellan 56 och 70 ° C. Vid den tiden placeras blodet och blandas tills mediet blir brun.

Servera i sterila petriskålar. Färgen på mediet är chokladbrun.

Kilar av tripticasein soja agar

Förfarandet för framställning av agar är detsamma som det som beskrivs för plattor, med skillnaden att i stället för att betjäna mediet på petriskålar fördelas det mellan 10 och 12 ml i rör med bakelitlock före sterilisering.

Därefter autoklaveras rören vid 121 ° C i 15 minuter. När de lämnar lutar de med hjälp av ett stöd och tillåter sig att stelna.

De beredda kilarna såds av ytan och tjänar till att upprätthålla vissa icke krävande levande mikroorganismer under en bestämd tid.

tillämpningar

Trypticasein soyagar används i följande fall:

-Som bas för att förbereda den klassiska blodagar som används rutinmässigt i de flesta laboratorier.

-Isoleringen av krävande bakterier.

-Observation av mönstret av hemolys.

-Utförande av diagnostiska test.

-Som underlag för att förbereda speciell blodagar för Corynebacterium diphteriae, med tellurcystin och blod av lamm.

-Som grund för att framställa lammblodagar, kan mer kanamycin-vankomycin för tillväxt av anaerober, särskilt Bacteroides sp.

-För underhåll av icke-krävande stammar (Bacterioteca).

-Mikrobiell aerob räkning i mikrobiell gränsstudie av vatten, miljö, mat och kosmetiska prover.

planterade

Prover kan utsädes direkt på ytan av trypticasein soja agar kompletterad med blod eller andra tillsatser. Den är sådd av utmattning.

Medan tripticasein soyagarplattor utan additiv vanligtvis används för subkulturmikrobiella stammar (bakterier eller jäst).

Kvalitetskontroll

Sterilitetskontroll

För att kontrollera steriliteten hos de olika medierna beredda med tryptikasin sojagar är det rekommenderat att göra följande: Från varje tillverkat parti bör en eller två plattor eller rör inkuberas utan ympning vid 37 ° C i 24 timmar för att visa sterilitet. I alla fall måste det förbli utan tillväxt.

Om det finns förorening måste hela partiet kasseras.

Tillväxtkontroll

För att studera korrekt funktion av tryptikasin sojagar kan följande bakteriestammar användas: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 och Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Stammarna sås och inkuberas i aerobios vid 37 ° C under 24 timmar.

I alla fall måste tillväxten vara tillfredsställande.

Du kan också använda svampar som komplexet Candida albicans ATCC 10231 och Aspergillus niger ATCC 16404. God tillväxt förväntas för båda stammarna.

Tillväxtkontroll och hemolysmönster av tripticasein soja agar kompletterat med blod

För att verifiera att blodagar fungerar korrekt med denna bas kan följande stammar användas: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 och Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

De är sådda och inkuberade vid 37 ° C i mikroaerofilicus i 24 timmar.

I alla fall måste tillväxten vara tillfredsställande, med tanke på att i S. pyogenes beta-hemolys (klar halo runt kolonin) och i båda stammarna av S. pneumoniae alfa hemolys (grönt halo runt kolonierna) bör observeras.

referenser

1. Wikipedia bidragsgivare. Trypticas Jag är agar. Wikipedia, den fria encyklopedin. 17 december 2018, 15:47 UTC. Finns på: https://en.wikipedia.org
2. Laboratorier Britania. Tryfin soja agar. 2015. Finns på: britanialab.com
3. Neogen Laboratories Sojaböna triptych. Finns på: foodafety.neogen.com
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnos av Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Panamericana S.A Redaktionell.
5. BD Laboratories Trypticas Jag är agar. 2014. Finns på: .bd.com