Agarblodfundament, användning och förberedelse



den blodagar det är ett berikat fast medium, differentiellt men inte selektivt. Den används för återvinning och tillväxt av en stor mängd mikroorganismer från kliniska prov eller subkulturer.

Klassisk blodagar bör ingå för sådd av de flesta kliniska prov som tas emot i laboratoriet. utom för pallprover där det inte är användbart, om inte förberedd med vissa ändringar.

Detta odlingsmedium är i grunden sammansatt av en berikad basagar och 5% blod. Basen av agar kan variera beroende på behoven, men kommer huvudsakligen att bestå av peptoner, aminosyror, vitaminer, köttxtrakt, natriumklorid, agar, bland andra.

När det gäller blod, är det vanligtvis nödvändigt att ha kontakt med ett bioterium för att få blod från djur, såsom får, kanin eller häst. Detta är dock inte alltid möjligt och ibland används humant blod.

Blodagarmediet kan framställas i laboratoriet eller kan köpas redo för företag som är dedikerade till det. Förberedelsen av detta medium är en av de mest känsliga, eventuella slarv i förberedelsen kommer att resultera i ett förorenat parti.

Därför bör alla möjliga försiktighetsåtgärder vidtas och i slutändan bör en kvalitetskontroll göras inkubering vid 37 ° C 1 platta för varje 100 som är beredd.

index

  • 1 Stiftelsen
  • 2 användningar
    • 2.1 Val av blodtyp
    • 2.2 Val av basaragarstyp
    • 2.3 Användning av blodagar enligt basmediet som används för dess framställning
  • 3 Framställning
    • 3.1 Väga och lösa upp
    • 3,2 sterilisera
    • 3.3 Aggregation av blod
    • 3.4 Häll in i petriskålarna
  • 4 referenser

foundation

Det har redan nämnts att blodagar har egenskapen att vara ett berikat, differentiellt och icke-selektivt medium. Källaren av var och en av dessa egenskaper förklaras nedan.

Blodagar är ett berikat medium eftersom det har som huvudadditiv 5-110% blod på en agarbas. Båda föreningarna innehåller många näringsämnen och den här egenskapen låter de flesta odlingsbara bakterier växa i den.

Den tillväxten sker utan begränsning. Av den anledningen är det icke selektivt. Om föreningar tillsätts till detta medium som förhindrar tillväxten av vissa mikroorganismer och gynnar tillväxten hos andra blir den selektiv. Detta är fallet om vissa typer av antibiotika eller antifungals tillsätts.

På samma sätt är blodagar ett differentialmedium, eftersom det gör det möjligt att skilja mellan 3 typer av bakterier: beta-hemolytisk, alfa-hemolytisk och gammahemolytisk..

Beta-hemolytiska är de som har förmåga att lysera eller bryta helt röda blodkroppar, som bildar en klar halo runt kolonierna, vilket sålunda producerar hemolys eller ß ß -hemólisis och mikroorganismer kallas beta-hemolytisk.

Exempel på ß-hemolytiska bakterier är Streptococcus pyogenes och Streptococcus agalactiae.

Alfa-hemolytiken är de som utför en partiell hemolys, där hemoglobinet oxideras till metemoglobin, vilket ger en grön färgning runt kolonierna. Detta fenomen är känt som hemolys a eller a-hemolys och bakterierna klassificeras som a-hemolytiska.

Exempel på a-hemolytiska bakterier är Streptococcus pneumoniae och Streptococcus av gruppen viridans.

Slutligen finns bakterierna kallade gamma-hemolytiska eller icke-hemolytiska. Dessa växer på agar utan att generera förändringar på den, en effekt som kallas γ-hemolys, och mikroorganismerna är γ-hemolytiska.

Exempel på y-hemolytiska bakterier: vissa stammar av Streptococcus från grupp D (Streptococcus bovis och Enterococcus faecalis).

tillämpningar

Blodagararkulturmediet är en av de mest använda i mikrobiologilaboratoriet.

Bland mikroorganismer med förmåga att växa i agarmediet blod är: strikta aeroba bakterier, fakultativa, mikroaerofil, anaeroba, Gram positiva eller Gram-negativa bakterier snabbt växande eller långsamt växande.

Vissa bakterier som är krävande eller besvärliga ur näringsmässig synvinkel, liksom svampar och jäst, växer också. På samma sätt är det användbart att subkulturera eller reaktivera stammar som är väldigt svaga metaboliskt.

Valet av blodtyp och basagar varierar emellertid beroende på den sannolika mikroorganismen som misstänks för återvinning och användningen av plack (kultur eller antibiogram)..

Val av blodtyp

Blodet kan vara lamm, kanin, häst eller människa.

Den mest rekommenderade är lammets blod, med några undantag. Till exempel, för att isolera Haemophilus-arter, där det rekommenderade blodet är häst eller kanin, eftersom lammets blod har enzymer som hämmar faktor V.

Den minsta rekommenderade är människan, men den är den mest använda, kanske för att det är lättast att få. 

Blodet måste defibrineras, erhållas utan någon typ av tillsatsmedel och friska djur. För användning av humant blod måste flera faktorer beaktas:

Om blodet kommer från individer som har lidit bakteriella infektioner, kommer de att ha specifika antikroppar. Under dessa förhållanden kommer tillväxten av vissa bakterier sannolikt att hämmas.

Om den erhålls från blodbanan innehåller den citrat och det är möjligt att vissa bakterier inte utvecklas i sin närvaro. Å andra sidan, om blodet kommer från patienter som tar antibiotika, kan tillväxten av mottagliga bakterier hämmas.

Och om blodet kommer från en diabetiker, stör det överskott av glukos den korrekta utvecklingen av hemolysmönster.

Val av basaragarartyp

Basagaragar som används för framställning av blodagar kan vara mycket breda. Bland dem är: närings agar, hjärthjärta infusionsagar, tryptikas soja agar, Müeller Hinton agar, Thayer Martin agar, Columbia agar, Brucella agar, Campylobacter agar, etc..

Användning av blodagar enligt basmediet som används för dess framställning

Näringsämne agar

Denna bas är den minst använda, eftersom den växer främst på icke-krävande bakterier, såsom enteriska baciller, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp, bland annat. Det rekommenderas inte att isolera Streptococcus.

Hjärthorminfusionagar (BHI)

Det är en av de mest använda som grunden för blodagar, eftersom den har nödvändiga näringsämnen för tillväxten av de flesta bakterier, inklusive Streptococcus sp och andra krävande bakterier. Även om det inte är lämpligt att observera mönster av hemolys.

Lambblod används vanligtvis med denna bas.

Blodagarvarianter kan också framställas, där andra föreningar tillsätts för att isolera vissa mikroorganismer. Till exempel, hjärthjärta infusionsagar, kompletterat med kaninblod, cystin och glukos, tjänar till att isolera Francisella tularensis.

Med cystint Tellurit är användbar för isolering av Corynebacterium diphteriae. Du kan använda blod från människor eller lamm.

Med den första kommer beta-hemolysen att se ut som en smal halo, medan med andra halo blir mycket bredare.

På samma sätt används denna bas tillsammans med bacitracin, majsstärkelse, hästblod och andra tillsatser för tillsatser (IsoVitaleX) för isolering av släktet Haemophilus sp från andningsprover.

Även, om tillsättes kombinationen av antibiotika kloramfenikol - gentamicin eller penicillin - streptomycin hästblod, är den idealisk för isolering av patogena svampar krävande, även överlägsen prestanda till Sabouraud glukos agar. Det är särskilt användbart vid isolering av Histoplasmakapselatum.

Tryptiv sojabönor

Denna bas är den mest rekommenderade för en bättre observation av mönstret av hemolys och utförandet av diagnostiska tester såsom taxa av optokin och bacitracin. Det är den klassiska blodagar som används rutinmässigt.

Med denna bas kan du också förbereda den speciella blodagar för Corynebacterium diphteriae, med tellurcystin och blod av lamm.

På samma sätt är kombinationen av denna agar med lammblod plus kanamycin-vankomycin idealisk för tillväxten av anaerober, speciellt Bacteroides sp.

Agar Müeller Hinton

Denna bas kompletterad med blod används för att utföra antibiotikumet för krävande mikroorganismer, såsom Streptococcus sp.

Det är också användbart för isolering av bakterier som Legionella pneumophila.

Agar Thayer Martin

Detta medium är idealiskt som en bas för blodagar när Neisseria-släktet misstänks, särskilt Neisseria meningitidis, som N. gonorrhoeae växer inte på blodagar.

Det tjänar också att utföra mottaglighetstester till Neisseria meningitidis.

Agar Columbia

Denna bas är utmärkt för såddprover av gastriska biopsier på jakt efter Helicobacter pylori.

Mediet framställdes genom tillsats 7% defibrinerat fårblod med antibiotika (vankomycin, trimetoprim, amfotericin B och cefsulodin) för att begränsa tillväxten av andra bakterier som kan vara närvarande.

Denna samma bas kompletterad med humant eller lammblod, nalidixsyra och kolistin är användbart för isolering Gardnerella vaginalis. Det är också idealiskt för att utvärdera antimikrobiell mottaglighet för antibiotika av samma mikroorganism.

Dessutom används den för framställning av blodagar för odling av anaerober, tillsättning av aminoglykosider och vankomycin.

Denna bas gör det möjligt för oss att korrekt observera mönster av hemolys.

Brucella Agar

Detta medium som används som grund för blodagar tillsammans med tillsatsen av K-vitamin är idealisk för odling av anaeroba bakterier. I detta fall rekommenderas användning av lammblod.

Campylobacter agar

Campylobacter agar kompletterad med 5% fårblod och fem antibiotika (cefalotin, amfotericin B, trimetoprim, polymyxin B och vankomycin), är det medium som används för att isolera Campylobacter jejuni i pallprover.

beredning

Varje kommersiellt hus ger på baksidan av förpackningen instruktionerna för att förbereda en liter kulturmedium. Motsvarande beräkningar kan göras för att framställa den önskade kvantiteten, enligt den valda basagaragar.

Väg och lös upp

Basagaragar kommer dehydratiserade (pulver), så det måste lösas i destillerat vatten justerat till pH 7,3.

Mängden som indikeras av den valda basagaragaren vägs och löses i motsvarande mängd vatten i en fiola, upphettas sedan till en måttlig värme och blandas med roterande rörelser tills allt pulver är upplöst..

sterilisera

Återstoden steriliseras i en autoklav vid 121 ° C i 20 minuter.

Aggregerat av blod

När autoklaven lämnar låt fiolaen svalna tills temperaturen svänger mellan 40 och 50 ° C; är en temperatur som mänsklig hud stöder och samtidigt har agaren ännu inte stelnat.

Därför berörs fiolen med handen och om värmen är tolerabel är den den idealiska temperaturen för att tillsätta motsvarande mängd defibrinerat blod (50 ml per liter agar). Blanda försiktigt till homogenisera.

Passagen av blodets aggregering är avgörande, för om det är gjort när mediet är mycket varmt kommer de röda blodkropparna att bryta och mediet kommer inte att tjäna till att observera hemolys.

Om det läggs för kallt kommer klumpar att bildas och ytan på mediet blir inte slät för att göra flöjten ordentligt.

Häll i petriskålar

Servera i sterila petriskålar omedelbart efter homogenisering av blodet. Cirka 20 ml hälls i varje petriskål. Denna procedur utförs i en laminärflödeskåpa eller nära brännaren.

När du serverar blodagar i Petriskålarna bor inga luftbubblor kvar på plattans yta. Om detta händer, går flammen av Bunsen-brännaren snabbt över plattan för att eliminera dem..

Plattorna får stelna och förvaras i kylskåp (2-8 ° C) inverterad tills de används. Innan du använder blod agar plattorna bör tempereras (låt dem ta rumstemperatur) att sådas.

De beredda plattorna varar ungefär 1 vecka.

referenser

  1. Bayona M. Mikrobiologiska förhållanden för odling av Helicobacter pylori. Rev Col Gastroenterol 2013; 28 (2): 94-99
  2. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktisk klinisk mikrobiologi. Universitetet i Cadiz, 2: a upplagan. UCA Publications Service.
  3. "Agarblod". Wikipedia, den fria encyklopedin. 10 dec 2018, 14:55 UTC. Dec 27 2018, 01: 49 en.wikipedia.org.
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnos av Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Panamericana S.A Redaktionell.
  5. CEDIVET Laboratory Veterinary Diagnostic Center. Guatemala. Finns på: trensa.com.
  6.  Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. (5: e upplagan). Argentina, Editorial Panamericana S.A..