Dela med sig:
Agar Sabouraud grund, förberedelse och användning
den Sabouraud agar, Kallas även Sabouraud dextrosagar, det är ett fast odlingsmedium, speciellt berikat för isolering och utveckling av svampar, såsom jäst, mögel och dermatofyter..
Därför kan detta inte saknas i ett mikrobiologilaboratorium för att undersöka närvaron av patogena eller opportunistiska svampar, antingen från kliniska eller icke-kliniska prover. På liknande sätt är det också idealisk för tillväxt av trådbakterier såsom Streptomyces och Nocardias. Dess användning är väldigt bred, den kan användas i mänsklig, djur-, växt- och industriell mykologi.
Detta medium skapades 1896 av Raimond Sabouraud framträdande läkare hudläkare, som blev en världsberömd specialist på sjukdomar i hårbotten, orsakat främst av dermatofyter.
Dess skapande var så viktigt att det har använts sedan dess och det fortsätter idag, men med vissa ändringar.
Även om speciellt för svampar, i detta medel bakterier de kan växa, således för prover med blandad flora inklusive antibiotika erfordras i beredningen och därmed inhibera tillväxten av bakterieflora som kan vara närvarande.
Valet av antibiotika bör göras med försiktighet och med hänsyn till vilken typ av svamp du vill återhämta sig, eftersom vissa hämmas i närvaro av vissa ämnen.
index
- 1 Stiftelsen
- 1.1 Mest använda kombinationer av Sabouraud dextrosagar med antibiotika
- 2 Framställning
- 2,1 Dextros Sabouraud Agar
- 2.2 Sabouraud dextrosagar (modifiering av Emmons)
- 2.3 Sabouraud dextrosagar (modifiering av Emmons) med kloramfenikol
- 2,4 Dextros Sabouraud Emmons agar med cykloheximid
- 2,5 Dextros Sabouraud Agar (Emmons) med kloramfenikol och cykloheximid
- 2.6 Andra antibiotika som kan tillsättas
- 3 Särskilda överväganden
- 4 Kvalitetskontroll
- 5 användningar
- 5.1 Primär odling
- 5.2 Sporulering
- 5.3 Bevarande
- 5.4 Mikrokulturer
- 5,5 i human mykologi
- 5.6 Djurmykologi
- 5.7 Miljökymkologi
- 5.8 Industriell mykologi
- 5.9 Växtmykologi
- 6 referenser
foundation
Den Sabouraud dextros agar-medium är i sin ursprungliga formuleringen är svagt selektiva, på grund av dess sura pH 5,6 ± 0,2, men ändå bakterier kan växa, särskilt i långvariga inkubationer.
Mediet innehåller kaseinpepton och pankreatisk digererad djurvävnad, som ger kol- och kvävekällan för utveckling av mikroorganismer.
Det innehåller också en hög koncentration av glukos, som fungerar som en energikälla, som gynnar tillväxten av svampar över bakterier. Alla blandas med agar-agar, en komponent som ger rätt konsistens.
Å andra sidan kan Sabouraud dextrosagar vara selektiv om antibiotika tillsätts.
Med antibiotika är det särskilt användbart i sårprover, öppna sår eller något prov i vilket stor bakteriell kontaminering misstänks.
Mest använda kombinationer av Sabouraud dextrosagar med antibiotika
-Sabouraud agar med kloramfenikol: Perfekt för återvinning av jäst och filamentösa svampar.
-Sabouraud agar med gentamicin och kloramfenikol: på detta sätt växer de flesta trådsvampar och jäst, och hämmar ett stort antal bakterier, inklusive Enterobacteriaceae, Pseudomonas och Staphylococcus.
-Sabouraud agar med cykloheximid: Det är speciellt användbart för prov från huden eller luftvägarna, så länge misstanke är dimorfa svampar.
Cycloheximid bör användas med försiktighet. Även om det används för att hämma tillväxten av icke-patogena eller miljömässiga svampar och jästar som kan vara närvarande som föroreningar i ett prov, hämmar det även tillväxten av vissa svampar, såsom Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp och andra opportunistiska svampar.
-Sabouraud agar med kloramfenikol plus cykloheximid: används huvudsakligen för att isolera dimorfa dermatofyter och svampar. Det har nackdelen att det hämmar vissa arter av opportunistiska svampar som Candida no albicans, Aspergillus, Zygomycetes eller C. neoformans.
-Sabouraud-agar med kloramfenikol, streptomycin, penicillin G och cykloheximid: är idealisk för extremt prover kontaminerade med bakterier och saprofytiska svampar, men har nackdelen att hämmar tillväxten av Actinomyces och Nocardias, förutom de opportunistiska svamparna som nämns ovan.
beredning
Om du har ingredienserna separat kan du förbereda det på följande sätt:
Dextrosagaragar Sabouraud
Ånger:
- 40 gr dextros
- 10 g pepton
- 15 g agar-agar
- Mät 1000 ml destillerat vatten
Alla ingredienser blandas, pH justeras till 5,6. Det löses lösta ämnen genom kokning, 20 ml medium fördelades i rör med 25 x 150 mm, utan fläns och lock företrädesvis bomull.
Andra rörstorlekar kan också användas, beroende på tillgänglighet.
De autoklaveras i 10 minuter vid en tryckatmosfär (121 ° C). Överskrid inte autoklaveringstiden. När autoklaven lämnas, lutas rören med ett stöd tills de stelnar i en flöjt topp..
Ett annat sätt är att lösa upp ingredienserna genom att värma tills det kokar. I samma autoklavfila i 10 minuter och fördela sedan 20 ml i petriskålar.
Om ett Sabouraud dextrosagarmedium finns tillgängligt, som redan innehåller alla ingredienser, fortsätter vi att väga den mängd som anges av kommersiella huset för en liter vatten. Resten av stegen är desamma som ovan beskrivna.
Dextrosagaragar Sabouraud (modifiering av Emmons)
Ånger:
- 20 gr dextros
- 10 g pepton
- 17 g agar-agar
- Mät 1000 ml destillerat vatten
Alla ingredienser blandas, pH justeras till 6,9. Fortsätt på samma sätt som i föregående fall.
Det finns kommersiella hus som erbjuder medium med alla ingredienser. I detta fall väger och förbereder sig som beskrivet i insatsen.
Sabouraud dextrosagar (modifiering av Emmons) med kloramfenikol
Kloramfenikol stamlösning
- Väg 500 mg kloramfenikolbas
- Mät 100 ml 95% etanol
- blanda
Sabouraud dextros agar-medium (Emmons) framställs såsom redan beskrivits och ytterligare per liter medium tillsätt 10 ml kloramfenikol stamlösning före autoklavering.
Dextrosagaragar Sabouraud Emmons med cykloheximid
Cykloheximid stamlösning
- Väg 5 g cykloheximid
- Mät 100 ml aceton
- blanda
Sabouraud-dextrosagarmediet (Emmons) framställs som redan beskrivet och dessutom tillsätts för varje liter medium 10 ml cykloheximid stamlösning före autoklavering.
Sabouraud dextrosagar (Emmons) med kloramfenikol och cykloheximid
Sabouraud dextros agar-medium (Emmons) framställs såsom redan beskrivits och ytterligare per liter medium tillsätt 10 ml kloramfenikol stamlösning och 10 ml av cykloheximid stamlösning före autoklavering.
Andra antibiotika som kan tillsättas
20 000 till 60 000 enheter penicillin per liter medium.
30 mg streptomycin per liter medium.
Båda bör införlivas efter autoklavering av mediet, svagt avkyld (50-55 ° C).
0,04 g neomycin per liter medium.
0,04 g gentamicin per liter medium.
Särskilda överväganden
För säkerhet är föredragen växt Sabouraud dextros agar i kilformade rör (lutande flöjt topp) snarare än i petriskålar, för att undvika dispersion och inandning av sporer.
Det är viktigt att rör med Sabouraud agar täckas med bomull och inte med skruvlock, eftersom det har visat sig att semianaerobe förhållanden hämmar bildandet av sporer i vissa stammar, till exempel Coccidioides immitis. Dessutom är de flesta svampar aeroba.
Om du använder ett skruvlock ska du inte stänga tätt.
Kvalitetskontroll
Det beredda mediet måste ha kvalitetskontroll för att verifiera att de fungerar korrekt. I detta syfte sås vissa kontrollstammar.
För Sabouraud kan dextrosagar med kloramfenikol ATCC-stammar användas. Candida albicans, vilket måste ha en utmärkt tillväxt. En annan platta inokuleras med stammar av Escherichia coli, måste hämmas fullständigt.
En oinkopplad platta inkuberas, i vilken ingen mikroorganism bör växa.
Sabouraud dextrosagar med kloramfenikol och cykloheximid kan användas stammar av Trichophyton mentagrophytes, måste utvecklas bra. En annan platta inokuleras med en stam av Aspergillus flavus, där det måste finnas liten tillväxt eller ingen tillväxt. Dessutom inkuberas en ej inokulerad platta för att visa dess sterilitet.
För Sabouraud dextrosagar med cykloheximid, stammar av Candida albicans, Trichophyton rubrum eller Microsporum canis, vilket bör visa god tillväxt.
På samma sätt en stam av Aspergillus flavus, visar knapp tillväxt eller ingen tillväxt. Slutligen inkubera en oinställd platta för sterilitetskontroll.
tillämpningar
Primär odling
Classic Sabouraud dextrosagar innehåller 4 gram dextros och är utmärkt som ett primärt isoleringsmedium, eftersom det visar den karakteristiska morfologin för varje svamp.
Det är också utmärkt att demonstrera produktionen av pigment. Det är emellertid inte det lämpligaste sättet att observera sporulation.
Det rekommenderas inte att växa Blastomyces dermatitidis, som hämmas av den höga koncentrationen av närvarande glukos.
Å andra sidan måste vissa överväganden beaktas för odling.
Vissa svampar utvecklas bättre vid rumstemperatur, som formar, andra utvecklas framgångsrikt vid 37 ° C, som vissa jästar, och andra kan utvecklas vid båda temperaturerna (dimorfiska svampar).
Av detta skäl är det ibland nödvändigt att använda flera Sabouraud agarplattor för samma prov, eftersom de ofta planteras i dubbletter för att inkubera en platta vid rumstemperatur och en annan platta vid 37 ° C..
Till exempel, Sporothrix schenckii den är sådd i två plattor; en inkuberas vid rumstemperatur för att erhålla formfasen och den andra inkuberas vid 37 ° C för erhållande av jästliknande fas, men i det senare är det nödvändigt att tillsätta 5% blod till mediet.
I andra fall, som i mycetomprover, sås två plåtar av Sabouraud agar, en med kloramfenikol och den andra med cykloheximid. Den första kommer att tillåta tillväxten av orsaksmedel av mycetom av svamp ursprung (Eumicetoma) och det andra orsaksmedlet av mycetomer av bakteriellt ursprung, såsom aktinomycetom..
sporulering
Dextros Sabouraud agar modifierad av Emmons innehåller 2 gram dextros och används inte bara för isolering utan också för sporulation och bevarande av svampar.
I detta medium om du kan återställa stammar av Blastomyces dermatitidis.
bevarande
För att bevara svampkulturer kan förvaras i kylskåp (2-8 ° C). Lagringstiden kan variera mellan 2 och 8 veckor. Efter denna tid måste de subkultureras för att upprepa processen.
Vissa svampar hålls bäst vid rumstemperatur, till exempel Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum och Microsporum audounii.
Behållandet av stammen kan förlängas för att undvika pleomorfism om dextrosen helt avlägsnas från agar och om mängden agar i mediet minskas för att undvika torrhet.
mikrokulturer
För identifiering av vissa filamentösa svampar är det nödvändigt att utföra mikrokulturer med Sabouraud agar eller andra speciella medel för att observera strukturerna för sexuell och asexuell reproduktion.
I mänsklig mykologi
Det används främst för diagnos av svampsjukdomar, särskilt de som påverkar huden och dess bilagor (hår och naglar).
Proverna kan vara sekretioner, exsudater, hud, hår, naglar, sputum, CSF eller urin. De patogener som vanligtvis är isolerade är dermatofyter, svampar som orsakar subkutana och systemiska svampinfektioner.
Djurmykologi
Djur påverkas ofta av svampinfektioner, så Sabouraud agar är lika användbar hos djur som i human mykologi..
Dermatofyter kan till exempel ofta påverka djur. Sådan är fallet med Microsporum canis var distortum, som ofta smittar hundar, katter, hästar, grisar och apor. också, Microsporum gips infekterar hundar, katter och nötkreatur.
Fåglar som kycklingar, hönor och kycklingar påverkas av Microsporum gallinae.
Andra svampar, som Zymonema farciminosum, de är också en orsak till sjukdom hos djur, främst i hästar, mulor och åsnor, vilket ger en viktig inflammation i lymfkärlen.
Sporothrix schenkii och Histoplasma capsulatum påverkar inhemska och mänskliga djur.
Miljökymkologi
Många patogena eller opportunistiska svampar kan koncentreras vid vilken tidpunkt som helst i en given miljö, särskilt i operationsrum och kliniker och sjukhus. Därför är det nödvändigt att kontrollera dem.
Andra sårbara utrymmen är bibliotek och gamla byggnader, som kan påverkas av koncentrationen av miljösvampar.
I miljöstudier används Sabouraud dextrosagar för isolering av svampar.
Industriell mykologi
Sabouraud dextrosagar kan inte saknas för studier av svampföroreningar vid framställning av kosmetika, mat, drycker, läder, textilier, bland annat.
Växtmykologi
Planterna drabbas också av sjukdomar som orsakas av svampar, som påverkar olika delar av växten, vilket även kan sluta skörden och orsaka stora förluster inom jordbruket.
referenser
- Cuenca M, Gadea I, Martín E, Pemán J, Pontón J, Rodríguez (2006). Mikrobiologisk diagnos av mykoser och känslighetsstudier mot antifungaler. Rekommendationer från det spanska samhället för infektionssjukdomar och klinisk mikrobiologi. Finns på: coesant-seimc.org
- ValteK Laboratory. (2009). Sabouraud dextrosagar med cykloheximid. Finns på: andinamedica.com.
- Navarro O. (2013). Veterinär mykologi. National Agrarian University. Nicaragua.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Mikrobiologisk diagnos av Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Panamericana S.A Redaktionell
- Casas-Rincon G. Allmän Mykologi. 1994. 2: e utgåvan Universidad Central de Venezuela, Bibliotek utgåvor. Venezuela, Caracas.