Papa dextros grund, förberedelse och användning



den papa dextrosagar Det är ett solidt, icke-selektivt näringsrikt kulturmedium. Det kan växa bakterie- och svamparter, men dess användning är speciellt indikerad för isolering av filamentösa svampar och jäst. Det är också känt som ett PDA-medium genom det engelska uttrycket Potato Dextrose Agar.

Det är särskilt användbart för isolering av fytopatogena svampar, det vill säga de som påverkar växter. För att plantera proven från infekterade växter kan andra medier såsom Sabouraud agar eller malta agar användas, men för rutinmässig användning föredras potatisdextrosagar föredraget på grund av större sporulering..

Det används också för räkning av svampkolonier i prover av kosmetika, läkemedel och vissa mejeriprodukter. Likaså är det fördelaktigt att plantera prover av hudskrapningar på jakt efter dermatofyter, vilka växer mycket bra i detta medium, utvecklar deras karakteristiska pigment.

Potatisdextrosmediet är mycket enkelt och lätt att förbereda i laboratoriet. Den innehåller, som namnet antyder, potatisinfusion, dextros och agar-agar. Dessutom kan hämmande ämnen tillsättas för att förhindra bakteriell tillväxt och öka selektiviteten för svamparter.

index

  • 1 Stiftelsen
  • 2 Framställning
    • 2.1 - Hemlagad (icke-kommersiell) beredning av papa dextrosagar
    • 2.2 - Kommersiell beredning av papa dextrosagar
  • 3 användningsområden
    • 3.1 Process för plantering av växtprover på kartongdextrosagar
    • 3.2 Förfarande för att plantera prover av hud-, hår- eller nagelvågar på papa dextrosagar
    • 3.3 Identifieringsförfarande
    • 3,4 kolonieantal
    • 3.5 Underhåll av svampstammar
  • 4 Kvalitetskontroll
  • 5 referenser

foundation

Papa dextrosagar är ett odlingsmedium som ger de nödvändiga näringsämnena för utveckling av filamentösa svampar och jäst.

Kombinationen av potatisinfusion med glukos ger den perfekta energikällan för en tillfredsställande tillväxt av svampar. Medan agaren är den som ger konsistens till miljön.

Mediet enbart hämmar inte tillväxten av bakterier, så det är ett icke-selektivt medium. För att göra det selektivt behöver du tillsättning av hämmande ämnen som vinsyra eller antibiotika.

beredning

-Hemlagad (icke-kommersiell) beredning av potatisdextrosagar

Petriskålar

Den är beredd på följande sätt:

Först och främst tvättas potatis mycket bra och tar bort smutsen de har. De skärs i tunna skivor med allt och skal. 200 g potatis vägs och placeras för att koka i en liter destillerat vatten i en halvtimme.

Efter tiden filtreras eller spänns hela preparatet genom en gasbindning.

Den erhållna vätskan kompletteras med destillerat vatten tills det når en liter. Till infusionen tillsätts 20 g agar-agar och 20 g dextros, blandas väl och autoklaveras vid 121 ° C vid 15 pund tryck under 15 minuter.

Låt svalna till 50 ° C och servera i sterila petriskålar. Förberedda plattor förvaras i kylskåp.

lagerbockar

Du kan också förbereda papa dextros agar kilar.

I detta fall innan autoklaveras placeras 12 till 15 ml medium i rör, därefter autoklaveras och ut liggande på specialmaterial, tills fast material. Spara i kylskåp.

Mediet förblir vid ett pH av 5,6 ± 0,2, men vissa laboratorier tillsätter 10% vinsyra för att sänka pH till 3,1 ± 0,1 för att hämma bakterieväxt.

På samma sätt föredrar andra laboratorier att lägga till antibiotika för att göra det selektivt för odling av svampar och förhindra bakteriell utveckling.

-Kommersiell beredning av potatisdextrosagar

Väg 39 g av det kommersiellt tillgängliga dehydratiserade mediet och lös upp i en liter destillerat vatten. Låt vila i 5 minuter.

Blandningen upphettas genom omröring ofta tills dess totala upplösning. Därefter steriliserades i en autoklav vid 121 ° C i 15 minuter.

Plattor eller kilar kan förberedas. Fortsätt som beskrivet ovan.

PH förblir vid 5,6 ± 0,2. Om pH 3,1 önskas bör 14 ml 20% steril vinsyra tillsättas innan den serveras på plattorna..

Färgen på det oförberedda mediet är beige och beredda är ljust gult med ett något grumligt eller opaliserande utseende.

tillämpningar

Förfarande för plantering av växtprover i potatisdextrosagar

-För löv med fläckar

Bladen skärs i bitar.

I ett 50cc glas med 50% alkohol, placera bitarna av bladen (bitar färgade och friska), för att desinficera ytan i 20 till 30 sekunder. Dra alkoholen och tillsätt 20% natriumhypoklorit i 40 till 50 sekunder om de är tunna blad och öka tiden till 80 sekunder om det är bark och stockar.

Dra natriumhypokloriten och ta med en steril klämma de desinficerade bitarna och placera dem på ytan av mediet (högst 10 stycken). Placera datumet och inkubera från 20 till 30 ° C.

-För frukt och knölar

Om frukten är köttig, öppna frukten som påverkas av svampen och ta bitar med en steril skalpell, både den sjuka delen och den friska delen och placera den på agarytan.

Om frukten är citrus, som en citron eller en apelsin, bör du öppna och så dina frön.

När fruktens yta påverkas och sporer observeras är det bäst att använda riven metod på plattan. Detta innebär att knacka sporerna med en spatel som "L" steriliserades och kyldes, och sedan utföra en sicksack sått två till tre gånger på agar.

-För korn

De desinficeras som beskrivs i bladen och placeras sedan på agar.

-För grenar och stjälkar

En skrapning av barken utförs och sedan tas bitar av den friska och sjuka delen och sönder direkt på agar..

De sådda plattorna inkuberas i aerobios vid 20-30 ° C i 72 timmar.

Förfarande för att plantera prover av hud-, hår- eller nagelvågar på papa dextrosagar

Provet måste tas med ett skalpblad nr. 11, antingen för att klippa drabbat hår, hudflingor eller naglar på jakt efter dermatofyter. Innan provet tas, desinficeras området med 70% alkohol.

-Hudprov

I skarpa skador bör skörden avskalas, eftersom det finns mer sannolikhet att hitta svampen.

I exudativa lesioner tas provet med torr eller våt tappning. Så omedelbart på potatisdextrosagar eller Sabouraud-agar. Undvik transportmedel.

En annan metod för provtagning är genom mattan torget teknik av Mariat och Adan Campos. I detta fall gnides det drabbade området 5 gånger med en bit sterilull för vidare odling.

Provet kan placeras direkt i odlingsmediet.

-Hårprov

Beroende på patologin kan den drabbade delen avskäras eller rivas av rötterna. Placera provet i odlingsmediet.

-Fingernailprov

Du kan skrapa eller klippa en viss del av den drabbade nageln. Det beror på vilken typ av skada.

Skär provet i 1 mm bitar före sådd för att öka sannolikheten för kontakt av svampen med odlingsmediet.

Identifieringsförfarande

Kolonierna som erhållits i plattan isoleras i rör innehållande kartongdextrosagar för att utföra koloniernas makroskopiska studie (utseende, färg, konsistens, utvecklingsgrad)..

Den mikroskopiska studien (observation av strukturer och deras formationer) kan göras genom mikrokulturer eller direkt observation under mikroskop mellan lamina och lamella.

Koloniantalet

Detta medium kan också användas för att bestämma belastningen av svampar och jäst närvarande i växtprover, mat, kosmetika eller droger. För detta ändamål används papa dextrosagar, kompletterad med antibiotika, såsom: (kloramfenikol, klortetracyklin eller båda).

Häll 1 ml provet - företrädesvis utspätt - i en steril och tom petriskål, smälta sedan en kartongdextrosagarplugg och låt svalna till 45 ° C. Häll över petriskålen och rotera tills den är homogeniserad. Låt det vila tills det stelnar.

Inkubera i aerobiosis vid 20-25 ° C (formar) eller vid 30-32 ° C (jäst) i 5-7 dagar eller mer, beroende på vilken typ av svamp som söks och typ av prov. Två plattor kan användas för att inkubera i båda temperaturområdena.

Underhåll av svampstammar

Papa dextrosagar kan användas för att bibehålla livskraftiga svampstammar i flera år.

För att göra detta odlas svampen i papa dextros agar kilar och när svampen är odlad, är den täckt med mineralolja. Oljan måste steriliseras i en autoklav i 45 minuter och har en approximativ viskositet av 300 till 330 Saybolt. Oljan ska överstiga kantens spets med 1 till 2 cm.

Kvalitetskontroll

Från varje beredd sats bör en eller två plattor tas och inkuberas vid 25 ° C i 48 timmar eller vid 20 ° C i 96 timmar. En bra sterilitetskontroll är en där det inte finns någon utveckling av kolonier.

Även kända eller certifierade kontrollstammar som:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. I alla fall förväntas god tillväxt.

referenser

  1. Laboratorier Britania. Papa glucosado agar. 2015. Finns på: britanialab.com
  2. Neogen Laboratories Potatisdextrosagar. Finns på: foodafety.neogen.com
  3. Insumolab Laboratorium Potatisdextrosagar. Finns på: insumolab.cl
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnos av Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  5. Casas-Rincon G. Allmän Mykologi. 1994. 2: e utgåvan Universidad Central de Venezuela, Bibliotek utgåvor. Venezuela, Caracas.
  6. Aceituno M. Utvärdering av mikrobiologisk kvalitet i ögonskugga, kompaktpulvertyp av ett nationellt produktionslaboratorium enligt Pharmacopeia Usp Reference Method 2005. Avhandling för att kvalificera sig för titeln farmaceutisk kemist. Universitetet i San Carlos de Guatemala.
  7. Cuétara M. Behandling av ytprover. Iberoamerican Mycology Magazine. 2007; pp. 1-12