Agar M.R.S grund, förberedelse och användning

den agar M.R.S. är ett selektivt fast odlingsmedium, som används för isolering och räkning av mjölksyrabakterier, speciellt av släktet Lactobacillus. Denna agar skapades 1960 av Man, Rogosa och Sharpe, mittlagret heter, men på grund av dess komplexitet används förkortningen M.R.S ofta..

Den består av proteospepton, köttextrakt, jästextrakt, glukos, sorbitanmonooleat, dikaliumfosfat, natriumacetat, ammoniumcitrat, magnesiumsulfat, mangansulfat och agar.

Denna komposition möjliggör korrekt utveckling av mjölksyrabakterier från kliniska prov, såsom avföring, vaginalsekretion, orala prov och bröstmjölk, såväl som mjölk- och köttfoder..

Det är inte rutinmässigt används i kliniska laboratorier, eftersom mjölksyrabakterier är sällan inblandade i patologiska processer. Användningen av M.R.S-agar är emellertid vanligare inom livsmedelsmikrobiologin..

Å andra sidan används detta medium av vissa forskningscentra vars syfte är studien av mjölksyrabakterier.

index

• 1 Stiftelsen
• 2 Framställning
• 3 användningsområden
  • 3.1 Karakteristika hos kolonierna
  • 3.2 Isolering av mjölksyrabakterier
  • 3.3 Räkning av mjölksyrabakterier
  • 3.4 På forskarnivå
• 4 Kvalitetskontroll
• 5 referenser

foundation

Agar Man, Rogosa och Sharpe har en ganska komplex komposition. Genom att bryta ned den funktion som varje komponent uppfyller kan dess grund förklaras.

Proteospepton, köttxtrakt, jästextrakt och glukos är näringsämnen som ger källa till kol, kväve, vitaminer och mineraler som är nödvändiga för bakteriell tillväxt. Dessutom är glukos den universella energikällan som används i de flesta kulturmedier.

Å andra sidan, för att gynna tillväxten av mjölksyrabakterier är närvaron av oumbärliga kofaktorer (katjoner) vid metabolism av Lactobacillus och besläktade bakterier nödvändig; Dessa föreningar är natrium-, magnesium- och mangansalterna.

Likaså sorbitanmonooleat eller polysorbat 80 är en viktig källa till fettsyror att absorberas som näringsämnen.

Dessutom verkar sorbitanmonoleat och ammoniumcitrat genom att hämma utvecklingen av den medföljande floran, speciellt gramnegativa bakterier, vilket ger selektiv karaktär av denna agar.

Slutligen är agar-agar vad som ger den fasta konsistensen till mediet.

Det finns andra varianter av Man Rogosa Sharpe agar; en är kompletterat med cystein (M.R.S.c), användbara för isolering av bifidobakterier, bland andra mikroorganismer. Dessutom finns det MRS-medium kompletterat med neomycin, paromomycin, nalidixinsyra och litiumklorid, i synnerhet för selektiv räkning av bifidobakterier i mejeriprodukter.

beredning

Väg 68,25 gram av dehydratiserat medium och lös upp i en liter destillerat vatten. Låt stå i 5 minuter. För att lösa upp i sin helhet, bringa till en värmekälla omröring ofta och låt koka i 1 till 2 minuter. Sterilisera i en autoklav vid 121 ° C i 15 minuter.

När du lämnar autoklaven låt stå några minuter och fördela fortfarande varmt i sterila petriskålar.

Låt solidisera och vända plattorna, beställa i plaquers och förvara i kylskåpet tills användning. Låt plattorna ta rumstemperatur innan de används.

Mediumets pH bör vara 6,4 ± 0,2. Vissa kommersiella hus rekommenderar pH mellan 5,5 och 5,9.

Det dehydratiserade mediet är beige och framställt är mörkt bärnstensfärgat.

Både det dehydratiserade mediet och de beredda plattorna bör förvaras vid 2 till 8 ° C.

tillämpningar

Agarplattorna M.R.S. De kan såas på ytan (utmattning eller med en spatel av Drigalski). Det kan också sådas på djupet. Plattor bör inkuberas vid 37 ° C i mikroaerofil (4% O₂ och 5-10% CO₂) i 24 till 72 timmar.

Sötmetoden väljs utifrån syftet (isolering eller räkning).

Karakteristika hos kolonierna

De presumptiva kolonierna av Lactobacillus växer vita och har ett mucoid eller krämigt utseende på denna agar. Då måste de identifiera.

Isolering av mjölksyrabakterier

För detta ändamål används plantningen genom ytan. Proverna som ska planteras kräver ett tidigare förfarande. 

När det gäller bröstmjölksprover rekommenderas att centrifugera 1 ml av provet vid 14 000 rmp i 10 minuter för att avlägsna fettlagret. 900 μl kasseras och i återstående 100 μl suspenderas sedimentet och hälls på M.R.S. Då måste det fördelas jämnt med en spatel av Drigalski.

I fallet med pallprover vägs en (1) gram avföring och homogeniseras i 9 ml 0,1% sterilt peptonerat vatten, vilket motsvarar en 1/10 utspädning. Därefter tillverkas seriella utspädningar tills en slutlig spädning av 10 erhålles^-4.

Slutligen tas 100 jil av utspädningarna 10^-2, 10^-3 och 10^-4 och varje utspädning utsädes på MRS-agar, fördelande jämnt med en Drigalski-spatel.

Räkning av mjölksyrabakterier

I detta fall görs sådden genom djup.

För prov av bröstmjölk, ta 1 ml och placera den i ett sterilt koniskt plaströr. MRS agar tillsätts vid en temperatur av ca 40 ° C upp till en slutlig volym av 25 ml, vilket ger en homogen blandning. Därefter hälls den i sterila petriskålar på ett enhetligt sätt och får stå tills det polymeriseras..

Utspädningar görs för avföringsprover, såsom beskrivits ovan. Ta 1 ml av varje utspädning och placera i sterila koniska plaströr. Smält MRS agar tillsätts till en volym av 25 ml.

Blandningen av varje utspädning hälls jämnt i sterila petriskålar. Låt det stå tills dess polymerisation.

På forskarnivå

Varje dag blir studien av mjölksyrabakterier mer intressant; speciellt forskare försöker känna till nya stammar och deras potential som initiering av ferment för standardisering vid tillverkning av mejeriprodukter, bland annat användningar.

I detta avseende har Alvarado et al. (2007) använde M.R.S. agar. att genomföra en studie där de isolerade, identifierade och karakteriserade mjölksyrabakterier närvarande i en hantverkare med rökt venezuelansk ost.

I ost fann de närvaron av bakterier av släktena Lactococcus och Lactobacillus, och drog slutsatsen att de isolat blandningar är lämpliga såsom start stammar i framställningen av ost av pastöriserad mjölk.

Å andra sidan, Sánchez et al. (2017) användes M.R.S agar. att undersöka närvaron av mjölksyrabakterier i smärtstillande området hos grisar, för att kunna använda dem som inhemska probiotika som ökar produktiviteten hos friska grisar.

Med detta medium lyckades de isolera fyra arter: Lactobacillus johnsonii Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae och Pediococcus pentosaceus.

På samma sätt Báez et al. (2019) använde M.R.S. agar. att utvärdera mjölksyrabakterier (BAL) och bifidobakterier med probiotisk potential i bröstmjölk och avföring från spädbarn.

De lyckades isolera 11 BAL och 3 Bifidobacteria sp i bröstmjölk och 8 BAL och 2 Bifidobacteria sp. i avföring Alla träffade vissa parametrar som ackrediterade dem som bakterier med probiotisk aktivitet.

Författarna drog slutsatsen att både bröstmjölk och avföring av uteslutande bröstfödda spädbarn tjänar som naturliga källor till probiotiska bakterier.

Kvalitetskontroll

För att utvärdera kvaliteten på M.R.S. kontrollstammar kan användas såsom:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli och Bacillus cereus.

De förväntade resultaten är tillfredsställande tillväxt för de första 6 bakterierna, medan E. coli och Bacillus cereus måste hämmas i sin helhet.

referenser

1. Alvarado C, Chacon Z, Otoniel J, Guerrero B, Lopez G. Isolering, identifiering och karakterisering av mjölksyrabakterier av en ost venezuelansk Artisan Rökt Andino. Dess användning som nybörjarekultivering. Ligt. (Maracaibo) 2007; 17 (3): 301-308. Finns på: scielo.org.
2. Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Alfaro Isolering av mjölksyra bakterier från pigmentets matsmältningsområde. Rev. undersökning. veterinär. Peru 2017; 28 (3): 730-736. Finns på: scielo.org.
3. Baez E, González G, Hernandez G, Lopez E, Mega M. Utvärdering av mjölksyrabakterier och bifidobakterier med probiotiska potential i bröstmjölk och spädbarn avföring i staden Acevedo, Miranda 2017. examensarbete för graden av akademiker bioanalyser. Universitetet i Carabobo, Venezuela.
4. British Laboratory M.R.S agar. 2015. Finns på: britanialab.com
5. Wikipedia bidragsgivare. MRS agar Wikipedia, den fria encyklopedin. 10 januari 2018, 19:44 UTC. Tillgänglig på: wikipedia.org Åtkomst 17 februari 2019.
6. Roy D. Media för isolering och uppräkning av bifidobakterier i mejeriprodukter. Int J Food Microbiol, 200.128; 69 (3): 167-82.