Agar LIA (Lysine Iron) grund, förberedelse och användning



den LIA agar (Lysine Iron) är ett biokemiskt test som används för att identifiera bakterier av familjen Enterobacteriaceae. Detta medium skapades av Edwards och Fife, baserat på Falkows formel.

Ursprungligen detta test var en buljong innehållande pepton, jästextrakt, glukos, L-lysin, bromkresolpurpur och destillerat vatten. Edwards och Fife tillsatte agar-agar, ferric ammoniumcitrat och natriumtiosulfat.

Testet består i grunden av att demonstrera närvaron av enzymlysindekarboxylaset, som är i stånd att reagera med karboxylgruppen i aminosyran L-lysin. En deaminering av aminosyran kan också uppstå på grund av närvaron av enzym-lysindeaminas.

Dessutom tillåter mediets sammansättning att demonstrera kapaciteten hos någon bakteriell genera för framställning av vätesulfid. Slutligen är det också möjligt att observera generationen eller ej av gas i mitten.

index

  • 1 Stiftelsen
    • 1.1 Peptoner och jästextrakt
    • 1,2 glukos
    • 1,3 L-lysin
    • 1,4 pH-indikator (bromokresol lila)
    • 1,5 Ammonium-järncitrat och natriumtiosulfat
  • 2 Tolkning av testet
    • 2.1 Decarboxylering av lysin
    • 2.2 Deaminering av lysin
    • 2.3 Produktion av vätesulfid (H2S)
  • 3 Resultatlista
  • 4 Framställning
  • 5 användningar
  • 6 referenser

foundation

Peptoner och jästextrakt

Liksom de flesta odlingsmedier innehåller järnlysinagar innehåll som ger källa till näringsämnen som är nödvändiga för bakteriell tillväxt. Dessa komponenter representeras av peptoner och jästextrakt.

glukos

Även denna agar innehåller fermenterbar kolhydratglukos. Det är känt att alla bakterier av familjen Enterobacteriaceae fermenterar glukos.

Detta steg är avgörande, eftersom det kommer att vara ansvarigt för att surgöra mediet, en väsentlig förutsättning för enzymet lysindekarboxylas, om det är närvarande, för att verka på dess substrat.

I någon bakteriell genera kan gasproduktionen på grund av fermenteringen av glukos observeras.

Gasen är uppenbart när en förskjutning av agar sker i röret, vilket lämnar ett tomrum i botten av den, eller genom fraktur på mitten i två eller flera delar.

L-lysin

När lysinen är dekarboxylerad bildas en diamin (kadaverin) och koldioxid.

Dekarboxylering sker i närvaro av koenzympyridoxalfosfat. Denna reaktion är irreversibel.

PH indikator (bromokresol lila)

Alla förändringar av pH inträffade i mediet genom de olika reaktionerna, detekteras av bromokresol-lila pH-indikatorn.

I detta avseende, när det finns försurning, blir mediet gult och när det finns alkalisering återgår mediet till den ursprungliga lila eller lila färgen.

När deaminering av lysin sker genom närvaron av enzymet lysin deaminas bildas en rödaktig färg på ytan, typisk i genera Proteus, Providencia och vissa arter av Morganella.

Detta beror på det faktum att alketo-kolsyra bildas under deamineringsprocessen, vilken reagerar med ammoniumcitrat i närvaro av syre vilket medför att nämnda färg.

Ammoniumferriscitrat och natriumtiosulfat

Å andra sidan kommer bakterierna som producerar vätesulfid att bevisas genom närvaron av natriumtiosulfat (svavelkälla) och ferriammoniumcitrat, som är utvecklaren av H2S.

Bakterier som har tiosulfatreduktasenzym har förmågan att agera genom att reducera den närvarande natriumtiosulfatet, bildande sulfit och vätesulfid (H2S).

Den senare är en färglös gas, men för att reagera med järnsaltform järnhaltig metall sulfid, som är en olöslig förening (svart fällning synlig).

Dock kan kapaciteten hos H-bildning2S med detta medium är inte särskilt pålitlig, eftersom vissa negativa lysindecarboxylasbakterier kan producera H2S kommer inte att bilda den svarta fällningen, eftersom mediets surhet stör. Därför rekommenderas att kontrollera med andra medel som innehåller järn.

Tolkning av testet

Dekarboxylering av lysin

Rören bör läsas efter slutet av 24 timmars inkubation, annars finns risk för felinterpretering av reaktionen, rapportering av falska negativa.

Kom ihåg att den första reaktionen kommer att hända är fermentering av glukos, därför alla rör efter 10 till 12 timmar till gult virarán.

Om i slutet av inkubationsperioden (24 timmar) observeras en gul bakgrund med en lila eller lila yta, är reaktionen negativ. Den lila färgen på ytan motsvarar alkaliniseringen av mediet genom användning av peptoner.

En positiv reaktion är en där botten och ytan av röret är helt lila, det vill säga det återgår till den ursprungliga färgen.

Därför bestämmer vem som bestämmer testets positivitet basen eller botten av mediet. Om du har tvivel om färgen kan du jämföra den med ett ej inokulerat LIA-rör.

Deaminering av lysin

Ett rör bevis deaminering av lysin kommer granat rödfärgad yta och en gul bakgrund (syra), eller hela röret rödaktig granat.

Denna reaktion tolkas som negativ för dekarboxyleringen av lysin, men positiv för deaminering av lysin.

Denna reaktion definieras och tolkas i avkanten.

Produktion av vätesulfid (H2S)

En positiv reaktion observeras genom utseendet av en svart fällning i hela eller en del av mediet. Vanligtvis mellan avgränsningsgränsen och basen.

Om fällningen sker i hela röret, kommer det inte att visa de andra reaktionerna som förekommer i mediet.

Rekord av resultaten

Vid tolkning av testet registreras resultaten enligt följande:

Läs först avfasningen, sedan botten eller taco, då produktionen av H2S, och slutligen gasproduktion.

Exempel: K / A + (-). Detta betyder:

  • K: Alkalisk bezel (lila)
  • A: Acid (gul) bakgrund, det vill säga negativ dekarboxyleringsreaktion och negativ deaminering.
  • +: Produktion av vätesulfid
  • (-): Utan gas.

beredning

Väg 35 g av det lysinagardehydrerade järnet och lösa upp i en liter destillerat vatten.

Värm tills agar är helt upplöst, koka det så mycket i en minut. Fördela 4 ml av mediet i 13/100 provrör med bomullslock.

Sterilisera i en autoklav vid 121 ° C i 15 minuter. Ta bort från autoklaven och låt vila på ett lutande sätt, så att det finns en djup bas och en kort avfasning.

Förvaras i kylskåp 2-8 ° C. Låt temperamentet före plantering av bakteriestammen.

Färgen på det dehydratiserade mediet är beige och mediet framställt rödfärgad färg.

Det slutliga pH-värdet för det framställda mediet är 6,7 ± 0,2.

Mediet blir gult med pH lika med eller mindre än 5,2 och lila vid pH 6,5 upp.

tillämpningar

Detta test, tillsammans med andra biokemiska tester, används för att identifiera baciller från familjen Enterobacteriaceae..

Medlet är sått med en rak slinga eller nål, en eller två stansar är gjorda till botten av röret, och sedan är ytan på mediet zigzagged.

Den inkuberas i 24 timmar vid 35-37 ° C i aerobios. Om det behövs lämnas det inkubation i 24 timmar mer.

Det är huvudsakligen användbart att skilja negativa Citrobacter laktosarter från Salmonella sp.

referenser

  1. Mac Faddin J. (2003). Biokemiska tester för identifiering av bakterier av klinisk betydelse. Tredje ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnos av Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  4. Laboratorier Britania. Lysinjärnagar. 2015. Finns på: britanialab.com
  5. BD Laboratories BBL Lysine Iron Agar Slants. 2007. Tillgänglig på: bd.com
  6. Valtek Laboratories Medium L.I.A. 2009. Tillgänglig på: andinamedica.com