Agar Hektoen grund, förberedelse och användning



den Hektoen agar eller enterisk Hektoen agar är ett fast, selektivt och differentiellt odlingsmedium. Det skapades vid Hektoen-institutet av kungen och Metzger för isolering av enteropatogena bakterier av släkten Shigella och Salmonella..

Mediet är sammansatt av proteospepton, jästextrakt, gallsalter, laktos, sackaros, salicin, natriumtiosulfat, natriumklorid, järn citrat, ammoniumcitrat, bromtymolblått, syra fuchsin och agar. Denna formulering gör det möjligt att differentiera släktena Shigella och Salmonella från andra bakterier kan växa i detta medium.

Även om det finns andra medel med samma funktion som Hektoen agar, ger detta större fördel jämfört med andra medel, särskilt när du vill återställa Shigella-arter.

Arter av båda släktena producerar svåra gastrointestinala problem hos människor på grund av konsumtionen av förorenad mat. därför är överföringen fekal - muntlig. Det är anledningen till att användningen av Hektoen agar huvudsakligen anges i den mikrobiologiska analysen av avföring och matprover..

index

  • 1 Stiftelsen
  • 2 Framställning
  • 3 Använd
  • 4 Kvalitetskontroll
  • 5 begränsningar
  • 6 referenser

foundation

Hektoen agar innehåller peptoner och jästextrakt som en källa till näringsämnen, vilket ger de väsentliga delarna för mikrobiell utveckling.

Det har emellertid också gallsalter som verkar genom att hämma tillväxten av vissa bakterier, speciellt Gram-positiva och några Gram-negativa. Det är av den anledningen att det anses vara ett selektivt medium.

Å andra sidan är Hektoen agar ett differentialmedium. Denna egenskap tilldelas närvaron av fermenterbara kolhydrater, såsom laktos, sackaror och salicin, tillsammans med pH-indikatorsystemet, representerat av bromtymolblått och syrafuchsin..

Alla bakterier som kan växa i detta medium som inte hör till släktet Salmonella och Shigella kommer att utveckla lax eller apelsin kolonier med undantag av släktet Proteus. Detta beror på jäsningen av en eller flera av de närvarande kolhydraterna, som surar mediet, vilket medför att pH-indikatorn blir.

För sin del kan släktet Shigella och Salmonella inte fermentera till någon av de närvarande kolhydraterna, utan att endast använda peptonerna som en energikälla som alkaliserar miljön och därför är dess kolonier blågröna.

Även i detta medium kan man skilja bakterier som kan bilda vätesulfid (färglös gas). Natriumtiosulfat fungerar som en källa till svavel medan järncitrat är det avslöjande medlet. Båda föreningarna möjliggör bildningen av en svart fällning av järnsulfid som bevisar reaktionen.

Den svarta fällningen i koloniens mitt med en genomskinlig halo runt ger ett fiskögd utseende. Denna egenskap antyder närvaron av släktet Salmonella.

Slutligen upprätthåller natriumklorid den osmotiska balansen och agar ger den fasta konsistensen till mediet.

beredning

Väg 76 g av dehydratiserat medium och lös upp i en liter destillerat vatten. Skaka blandningen kraftigt och låt sedan vila i 10 till 15 minuter. Det kan värmas och kokas, vilket ger rotationsrörelser tills dess totala upplösning. Detta medium ej autoklaveras.

När mediet når en temperatur av ca 45 ° C hälls en volym på 20 ml direkt i sterila petriskålar..

Agar får stelna. Vid den tiden är de redo att användas. Det är lämpligt att använda dem omedelbart. Om de inte är möjliga ska de förvaras i kylskåp tills de används.

Plattorna ska tas bort tidigt från kylskåpet innan de planteras för att ta rumstemperatur.

Mediet pH bör vara 7,5 ± 0,2. Färgen på det dehydratiserade mediet är lila och framställt är brungrönt.

användning

Användningen av Hektoen agar rekommenderas för sökandet efter bakterier av släktet Shigella och Salmonella i avföring och matprover..

Möjligheten att isolera dessa bakterier ökar kraftigt om provet tidigare berikats i specialbuljonger, såsom selenitbuljong, selenitcystinbuljong, tetrathionatbuljong, etc..

Inokulatet måste vara starkt och sådden görs genom striering. Plattorna inkuberas vid 37 ° C i 24 till 48 timmar i aerobios.

Inkubation rekommenderas i 48 timmar eftersom koloniernas egenskaper är tydligare för deras tolkning och differentiering vid denna tidpunkt.

Kvalitetskontroll

För att utföra kvalitetskontroll på detta medium används certifierade bakteriestammar, såsom: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 och Shigella sonnei ATCC 25931.

De förväntade resultaten är följande: Salmonella typhimurium och  Salmonella enteritidis De måste utveckla grönblå kolonier med eller utan ett svart centrum. Medan Shigella-arterna växer som blågröna kolonier.

Du kan också inkludera stammar av Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 och Staphylococcus aureus ATCC 25923.

I dessa fall är de observerade egenskaperna följande: E. coli och K. pneumoniae I detta medium kommer de att utveckla lax-till-orange kolonier, med en fällning av samma färg runt dem. Under tiden kommer Proteus att utveckla blågröna kolonier med eller utan ett svart centrum.

medan S. aureus och  E. faecalis bör hämmas, ibland E. faecalis lyckas växa som gula kolonier, mycket små.

Å andra sidan, eftersom detta medium ej steriliseras i en autoklav, är det viktigt att utvärdera mediumets sterilitet. Därför bör varje sats som framställs inkuberas en till två plattor utan ympning vid 37 ° C under 24 timmar i aerobios.

Självklart förväntas det att det inte finns någon tillväxt på något sätt på plattan.

begränsningar

-Proteus species kan växa i detta medium och egenskaper kolonier kan förväxlas med Salmonella eller Shigella species. Av denna anledning måste en misstänkt koloni bekräftas med biokemiska tester.

-Det är nödvändigt att följa användningen av detta medium med andra mindre selektiva agar, för om den sökta mikroorganismen finns i låga koncentrationer kan det inte utvecklas i detta medium.

-Överhett inte under förberedelsen, eftersom överdriven värme ändrar mediets sammansättning.

-Ovanligt laktosgerande Salmonella kolonier kan förekomma obemärkt.

referenser

  1. Wikipedia bidragsgivare. Hektoen enterisk agar. Wikipedia, den fria encyklopedin. 13 mars 2019, 23:38 UTC. Tillgänglig på: .wikipedia.org / Åtkomst den 16 mars 2019.
  2. BD Laboratories BD Hektoen Enteric Agar (HE Agar). 2013. Finns på: bd.com
  3. Laboratorier Britania. Hektoen Enteric Agar. 2015. Finns på: britanialab.com
  4. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Agar Hektoen agar. Finns på: f-soria.es
  5. Difco & BBL Manual, Hektoen Enteric Agar. 2: a upplagan. Finns i: bd.com/europe