Agar Endo grund, förberedelse och användning

den Endo-agar eller medium Endo är ett fast, differentialkulturmedium med en viss grad av selektivitet. Den ursprungliga formeln skapades av Endo 1904 för att skilja laktosjäsande bakterier från icke-fermenterande bakterier. I början var det utformat för isolering av Salmonella typhi, men senare vände sig medlet av mediet till sökandet efter coliformer.

Principen för Endo-agar har bibehållits, men dess formulering har genomgått otaliga förändringar genom åren. För närvarande är det medium sammansatt av peptisk digerering av djurvävnad, laktos, dikaliumvätefosfat, natriumsulfit, basisk fuchsin och agar.

Medelns huvudanvändning har kopplats till isoleringen och differentieringen av gramnegativa baciller som tillhör familjen Enterobacteriaceae och till andra familjer i närheten..

Lång användes vid detektion av koliform i vattenprover, livsmedel och mejeri, men nu har flyttat använder detta medium andra liknande funktioner. Några mikrobiologilaboratorier använder emellertid denna agar för isolering av Enterobacteriaceae från prover av kliniskt ursprung.

index

• 1 Stiftelsen
• 2 Framställning
  • 2,1 Endo-agar
  • 2,2 variant av agar m-endo
• 3 Använd
• 4 Kvalitetskontroll
• 5 begränsningar
• 6 referenser

foundation

Endo-agar innehåller peptoner som tjänar som källa till aminosyror, kväve, kol och energi, som är nödvändiga för tillväxten av obemandande mikroorganismer.

Å andra sidan tillhandahålles agarets något selektiva karaktär genom tillsats av natriumsulfit och basiskt fuchsin; båda komponenterna delvis eller helt hämmar utvecklingen av mest Gram-positiva bakterier.

Differentiella karaktär ges av närvaro av fermenterbart kolhydrat, vilket i detta fall är laktos och basfuksin, vilket också tjänar som indikator för pH.

Gram-negativa bakterier som växer på denna agar och kan fermentera laktos kommer att bilda starka rosa kolonier; vara patognomonisk av Escherichia coli bildandet av mörkröd kolonier med en grön metallisk glans iriserande. Detta beror på den höga produktionen av syror från fermentering av kolhydrater.

Det bör noteras att mediet som ligger runt kolonierna också vänder sig till en stark rosa färg. Medan icke-fermenterande gram-negativa baciller av laktos bildar blekrosa kolonier som liknar medelstora eller färglösa.

Kalciumvätefosfat balanserar mediumets pH och agar är komponenten som ger den fasta konsistensen.

beredning

Endo Agar

Väg 41,5 g av det dehydratiserade mediet och lösa upp i 1 liter destillerat vatten. Värm blandningen genom att omröra ofta tills det finns en fullständig upplösning av mediet. Sterilisera i autoklav vid 121 ° C, vid 15 Ib tryck, i 15 minuter.

Vid avlägsnande från autoklaven, låt svalna till en temperatur av cirka 45-50 ° C, skaka blandningen för att homogenisera innan den serveras. Häll 20 ml i sterila petriskålar.

Låt plattorna stelna, invertera och förvara i en låda eller linda med mörkt papper före förvaring i kylskåp. Det är mycket viktigt att skydda preparerat medium från direkt ljus. En rekommenderad övning är att förbereda det exakta belopp som kommer att behövas.

Om de förvaras i kylskåp ska plattorna tempereras innan de används.

Mediumets pH bör ligga mellan 7,2 och 7,6 och färgen av det framställda mediet är blekrosa..

Variant agar m-Endo

En annan version av Endo-agar (m-Endo) efter formeln för McCarthy, Delaney och Grasso, innehållande flera föreningar och varierar i form av preparatet.

Denna variant innehåller: laktos tryptos, digererades enzymatiskt kasein digere enzym av djurvävnad, natrium, kaliumfosfat dibasisk, natriumsulfit, jästextrakt, kaliumfosfat monobasisk, basiskt fuksin, natriumdeoxicholat klorid, laurylsulfat av natrium och agar.

I detta fall väger vi 51 g av dehydratiserat medium och suspenderar det i 1 liter destillerat vatten innehållande 20 ml etanol.

Värm något under omrörning tills mediet är helt upplöst. Överhett inte och sterilisera inte i en autoklav. När blandningen är homogen, servera den i sterila petriskålar och låt det stelna.

användning

I vissa länder används det fortfarande för räkning av totala och fekala koliformer i vatten- och livsmedelsprover, särskilt närvaron av Escherichia coli som huvudindikator för fekal kontaminering.

M-Endo Agar rekommenderas av American Public Health Association (APHA) för övervakning och kontroll program desinfektion och avloppsrening, samt att utvärdera kvaliteten på dricksvattnet.

Den mest använda metoden är membranfiltrering, efter anrikning av provet med Lauryl-sulfatbuljong i 2 till 4 timmar.

Den kan också användas som ett substitut för EMB agar i mikrobiologisk analys av mat och vatten för den mest sannolika antalet teknik (NMP), specifikt i den fullständiga fas bekräftande att bekräfta närvaron av E. coli från grumliga EG-buljonger.

Kvalitetskontroll

För att utvärdera kvaliteten på den beredda Endo-agar-batchen sås kända eller certifierade kontrollstammar.

Bland de stammar som kan användas för detta ändamål är: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 och Enterococcus faecalis ATCC 11700.

Stammarna såddas genom utmattning och inkuberas vid 37 ° C i 24 timmar i aerobios.

De förväntade resultaten är:

• till Escherichia coli: kolonier starka röda, med metallisk glans.
• till E. cloacae och K. pneumoniae kolonierna ska vara rosa mucoid.
• I fallet med S. typhimurium, S. flexneri och P. mirabilis kolonierna är vanligtvis blekrosa eller färglösa.
• Slutligen, E. faecalis Det förväntas vara delvis inhiberat, därför bör tillväxten vara fattig med mycket små kolonier av stark rosa.

begränsningar

-Endo-mediet har låg selektiv kraft, därför är det möjligt att vissa Gram-positiva mikroorganismer såsom Staphylococcus, Enterococcus och jäst kan växa.

-Andra baciller som inte hör till familjen Enterobacteriaceae kan utvecklas i detta medium, som till exempel Pseudomonas sp och Aeromonas sp. Karakteristika för dessa stammar är färglösa oregelbundna kolonier.

-Detta preparerade medium är mycket känsligt för ljus, därför försvagas en långvarig exponering för detta indikatorsystemet, irreversibelt skadligt mediet.

-Komponenterna i mediet anses cancerframkallande, därför bör direktkontakt undvikas.

-Det dehydratiserade mediet är mycket hygroskopiskt och bör förvaras i sin ursprungliga behållare vid rumstemperatur, tätt stängt och i torr miljö.

referenser

1. BD Laboratories Endo Agar. 2013. Finns på: bd.com
2. Neogen Laboratories M Endo Agar. Finns på: foodafety.neogen.com
3. "Agar Endo." Wikipedia, den fria encyklopedin. 7 sep 2017, 08:27 UTC. 28 februari 2019, 22:55. Finns på: en.wikipedia.
4. MercK laboratorium. Endo-agar 2019. Finns på: merckmillipore.com
5. Laboratories Technical Sheet. M -Endo Agar LES. 2015. Tillgänglig på: liofilchem.net