Agar EMB grund, förberedelse och användning



den EMB-agar är en selektiv och differentierad medium som används för fast odlings isolering av gramnegativa baciller huvudsakligen av familjen Enterobacteriaceae och andra gramnegativa bakterier krävande. Det är också känt av akronymet EAM, vilket betyder eosin-metylenblå.

Detta medium skapades av Holt-Harris och Teague 1916. Den innehåller pepton, laktos, sackaros, dikaliumfosfat, agar, eosin, metylenblått och vatten. Den liknar väldigt MacConkey agar, speciellt om man använder EMB-agar modifierad av Levine, som inte innehåller sackaros.

Faktum är att varje laboratorium bestämmer om det fungerar med den ena eller den andra, eftersom de uppfyller samma funktion, även om de biologiskt är olika.

Den presenterar till och med samma nackdel som den klassiska MacConkey-agaren när det gäller svavelproduktion av släktet Proteus. För att undvika detta fenomen kan du därför öka koncentrationen av agar upp till 5%.

index

  • 1 Stiftelsen
    • 1.1 Selektiv
    • 1.2 Differential
  • 2 Framställning
  • 3 användningsområden
  • 4 Kvalitetskontroll
  • 5 Slutliga överväganden
  • 6 referenser

foundation

selektiv

EMB-agar är subtilt selektiv eftersom den innehåller de aniliniska färgämnen (eosin metylen blå), vilka fungerar som inhibitorer, förhindra tillväxt av de flesta grampositiva bakterier och vissa gramnegativa bakterier som kräver.

Emellertid har denna nackdelen agar vissa grampositiva bakterier tål närvaro av hämmande ämnen och växer som färglösa kolonier liten pinpoint såsom Enterococcus faecalis och några staphylococcus.

Du kan också odla vissa jästar, t.ex. Candida albicans komplex, Det kommer att ge mycket små rosa kolonier. Även chlamydosporer kan utvecklas från denna jäst om provet såddas med djup.

avvikelsen

Dessutom är EMB agar också en differentialmedium, eftersom dessa färgämnen tillsammans (eosin metylen blått) har egenskapen att bilda en fällning i surt pH, vilket således de tjänar som indikatorer på produktion därav.

Svagt jäsande laktos- eller sackarobakterier producerar därför lila kolonier om 24 till 48 timmar. Till exempel släktet Klebsiella, Enterobacter och Serratia.

De bakterier som starkt fermenterar laktos, såsom Escherichia coli, eller sackaros, som Yersinia enterocolitica eller Proteus penneri, bildar en grönaktig svart fällning, vilket ger en metallisk glansegenskaper hos dessa arter.

Det bör noteras att om EMB-levinmediet används (utan sackaros), Yersinia enterocolitica och Proteus penneri De kommer att producera transparenta kolonier.

Bakterier som inte fermenterar laktos eller sackaros närs av närvaron av peptoner, vilka ger aminosyror och kväve som är nödvändiga för bakteriell utveckling och producerar transparenta kolonier. Till exempel, Salmonella och Shigella-släkten, bland andra.

Det är också viktigt att notera att släktet Acinetobacter kan ha lavendel blå kolonier, men inte fermenterings laktos eller sackaros, men har egenskapen att fixera metylenblått i sin cellvägg. Detta kan också hända med andra oxidativa bakterier.

beredning

Det ursprungliga dehydratiserade mediet är ljust beige.

För att framställa detta odlingsmedium bör 36 gram av det dehydratiserade mediet vägas och suspenderas i en flaska innehållande en liter destillerat vatten.

Efter att ha lämnat blandningen i 5 minuter i vila, sätt fiola till en värmekälla, blanda kraftigt och ständigt tills det kokar och det är helt upplöst..

Därefter steriliseras det upplösta odlingsmediet med autoklaven vid 121 ° C i 15 minuter.

Vid slutet av tiden avlägsnas den från autoklaven och lämnas för att vila kort. Sedan serveras det till och med varmt (45-50 ° C) mellan 15 och 20 ml agar i varje steril petriskål. Mediet ska vara blått lakmus.

Efter servering lämnas plattorna litet upptäckta tills agaren kyler lite. Därefter täcks de och får solidifiera helt. Senare beställs de i en inverterad plåthållare och förvaras i kylskåp (8 ° C) tills de används.

Denna procedur utförs företrädesvis i en laminärflödeskåpa eller framför Bunsen-brännaren för att undvika förorening.

Det är viktigt att komma ihåg att varje kommersiellt hus anger vilket belopp som ska vägas för att förbereda kulturmediet.

Det slutliga pH-värdet i mediet bör vara 7,2 ± 0,2

tillämpningar

Detta medium används för att beså urin och avföring eller någon form av kliniska prover, särskilt om du misstänker förekomst av krävande gramnegativa bakterier, såsom baciller som tillhör familjen Enterobacteriaceae, som växer mycket väl i detta medium.

De enteropatogena bakterierna i släkten Shigella och Salmonella utmärks av deras färglösa eller lite gula kolonier.

Andra icke-fermenterande laktosbaciller växer också, bland annat Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter..

Också är mycket användbart vid mikrobiologisk analys av mat och vatten detta medium, är det idealiskt för den fullständiga fasen bekräftande bestämning av koliforma bakterier, dvs för att bekräfta närvaron av E. coli från grumliga EG-buljonger, från den mest sannolika taltekniken (NMP).

Kvalitetskontroll

För att verifiera att det nyligen odlade odlingsmediet fungerar bra kan kontrollstammar planteras för att observera koloniernas egenskaper och verifiera att de ger som förväntat.

För detta gäller ATCC-stammar eller väl identifierade stammar av E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa och några gram-positiva bakterier, som S. aureus.

Det förväntas att E. coli Generera välutvecklade blå-svarta kolonier med grön metallisk glans. Så länge, Enterobacter aerogenes och Klebsiella sp De måste ge välutvecklade mukösa kolonier bluish-black.

För sin del, salmonella typhimurium och Shigella flexneri, De måste utveckla stora kolonier, färglösa eller med en liten gul färg.

Slutligen genren Pseudomonas aeruginosa det växer som färglösa kolonier av oregelbunden storlek, medan gram-positiva bakterier ska hämmas helt eller växa sparsamt med mycket små kolonier.

Slutliga överväganden

Ibland medför steriliseringen metylenblå att minska, observera ett orange medium. För att metylenblått ska oxidera och den lila färgen ska återvinna, måste den blandas försiktigt tills färgen återhämtar sig.

Efter det att steriliseringen kan fälla ut färgämnet, så måste det blandas väl innan du serverar petriskålarna.

referenser

  1. Camacho A, Giles M, Ortegon A, Palao M, B och Velazquez Serrano O. 2009. Tekniker för Mikrobiologiska Food Analysis. Andra ed. Kemiska fakulteten, UNAM. Mexiko.
  2. Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. Karakterisering och fördelning av stammar av Escherichia coli Potentiellt patogena isoler av kycklingbroiler från fjäderfäplantor i Peru. Rev. undersökning. veterinär. Peru 2012 23 (2): 209-219. Finns på: scielo.org.
  3. Laboratorier Conda S.A. Eosin Agar och Methylene Blue. 2010. Tillgänglig på: condalab.com
  4. Laboratorier Britania. Levine E.M.B (med Eosin och Methylene Blue) 2011. Tillgänglig på: britanialab.com
  5. BD Laboratories BD EMB Agar (Eosin Methylen Blue Agar), Modifierad. 2013. Finns på: bd.com
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. (5: e upplagan). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Mikrobiologisk diagnos av Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Panamericana S.A Redaktionell