Agar har standard grund, förberedelse och användning

den standardkontoagar är ett fast, icke-selektivt odlingsmedium som är utformat för kvantifiering av den aeroba mikrobiella belastningen som finns närvarande i prover av dricksvatten, avloppsvatten, mjölkdrycker, bland andra livsmedel. Detta innebär att det är även känd som agar PCA, för dess akronym på engelska Plate Count Agar. Det skapades 1953 av Buchbinder, Baris och Goldstein.

Standard agarmediumkontot består av jästextrakt, triptin, glukos, agar och destillerat vatten. Denna formulering innehåller grundläggande näringsämnen som tillåter utvecklingen av den aktuella aeroba mikrobiella belastningen, inte krävande.

Eftersom mediet inte innehåller inhibitorer kan bakterierna utvecklas utan några restriktioner, så det är idealiskt för det allmänna kolonitalet. Plådekvantifieringstekniken detekterar emellertid inte alla närvarande bakterier, utan endast de som kan växa under de miljöförhållanden som standardsågen agar utsätts för..

I detta avseende försöker plåtkvantifieringstekniken i allmänhet bestämma mängden aeroba mesofila bakterier, det vill säga de som utvecklar vid temperaturer mellan 25 och 40 ° C, med en optimal temperatur av tillväxt vid 37 ° C.

Denna bakteriegrupp är mycket viktig, eftersom det finns de flesta patogena bakterierna för människan.

Det bör noteras att det ibland kan vara intressant att kvantifiera mängden psykofila bakterier som finns närvarande i maten. Dessa bakterier är de som utvecklas vid låga temperaturer (< 20°C) y son las responsables de que los alimentos se descompongan más rápido, aun estando en nevera.

På liknande sätt kan termofila bakterier, som utvecklas i intervallet 50 ° C till 80 ° C eller mer, vara viktiga i vissa typer av livsmedel såsom konserverad.

Mikrobiell kvantifiering uttrycks i kolonnbildande enheter (CFU) per gram eller milliliter prov.

index

• 1 Stiftelsen
• 2 Framställning
  • 2.1 För platthällstekniken
  • 2.2 För ytplantering
• 3 Använd
  • 3.1 Plåthällningsteknik (sådd av djup)
  • 3.2 Teknik sådd på ytan
• 4 Kvalitetskontroll
• 5 begränsningar
• 6 referenser

foundation

Standardräkningsmediet är utformat för att möjliggöra en tillfredsställande utveckling av icke-krävande aeroba bakterier, eftersom jästextrakt, triphein och glukos ger de nödvändiga näringsämnena för god mikrobiell utveckling.

Å andra sidan har mediet en klar färg och ett genomskinligt utseende, vilket är anledningen till att det är idealiskt för att visa kolonierna som utvecklats genom metoden för djup sådd (hällning i en tallrik).

Det är också möjligt att räkna kolonier med sättet att så på ytan med en spatel av Drigalski.

När den mikrobiella belastningen är hög måste decimalutspädningar av provet som studeras göras för att räkna CFU: erna.

Det bör noteras att detta medium rekommenderas av American Public Health Association (APHA) för räkning av aeroba mesofiler.

beredning

Väg 23,5 g av det dehydratiserade mediet och lösa upp i en liter destillerat vatten. För fullständigt upplösning måste blandningen upphettas omgående tills den kokar. De efterföljande stegen beror på såddstekniken som ska användas.

För plåthälltekniken

Distribuera genom att dispensera 12-15 ml i provrören. Därefter steriliseras i en autoklav vid 121 ° C i 15 minuter. Tillåt att stelna vertikalt i form av ett block. Förvaras i kylskåp tills det används.

Smält cue när den ska användas. Efter smältning behåll det i ett vattenbad vid 44-47 ° C medan prover förbereds.

För plantering på ytan

Sterilisera mediet i en autoklav vid 121 ° C och fördela sedan 20 ml i sterila petriskålar. Låt solidisera, invertera och förvara i kylskåp tills användning.

Mata plattorna före användning. Mediumets pH bör vara 7,0 ± 0,2.

användning

Agarstandardräkningen används i den aeroba mesofilräkningstekniken under den mikrobiologiska analysen av vatten och mat. Räkningen av aeroba mesofiler är nödvändig, eftersom det bestämmer provets hygienkvalitet under studien.

Tillämpningen av denna teknik (med användning av detta medium) möjliggör makroskopisk visualisering av isolerade kolonier för deras kvantifiering.

Plackhällteknik (sådd av djup)

-process

Tekniken består av följande:

1) Homogenisera provet för att omfördela de närvarande bakterierna.

2) En initial suspension utförs i en steril flaska eller påse, varvid förhållandet 10 g eller 10 ml prov i 90 ml utspädningsmedel (10^-1).

3) Från den inledande upphängningen görs de relevanta decimalutspädningarna beroende på typ av prov. Ex: (10^-2, 10^-3, 10^-4). Utspädningarna är gjorda med peptonvatten eller fosfatbuffert.

För att göra detta, ta 1 ml av den ursprungliga suspensionen och placera i 9 ml spädmedel, fortsätt utspädningarna om det behövs, och ta nu 1 ml utspädning.^-2 och så vidare.

4) Ta 1 ml av varje utspädning och lägg i tomma, sterila petriskålar.

5) Lägg till varje platta 12 till 15 ml standardtalagar, som tidigare smälts och sätts vid 44-47 ° C.

6) Ge jämna rotationsrörelser till plattorna för att fördela provet till agaren jämnt och tillåta att stelna.

7) Omvända plattor och inkubera vid 37 ° C i aerobios i 24 till 48 timmar.

8) När tiden är klar fortsätt undersöka plattorna och räkna kolonierna i den utspädning som tillåter den. Den är vald för att räkna de plattor som har mellan 30 och 300 CFU.

Räkningen kan göras manuellt eller koloniräknaren kan användas.

De tillåtna värdena per ml prov kan variera från land till land enligt de standarder som de regleras.

-Beräkning av UFC

Den allmänna beräkningen görs med följande formel:

Uttryck resultaten i 1 eller 2 siffror, multiplicera med lämplig bas 10. Exempel: Om resultatet är 16.545, avrundas det baserat på den tredje siffran till 17.000 och kommer att uttryckas enligt följande: 1,7 x 10⁴. Nu, om resultatet var 16.436 är avrundat till 16.000 och uttrycks 1,6 x 10⁴.

Teknik planterade på ytan

-process

-Inokulera med 0,1 ml av det direkta provet om det är flytande, initial suspension 10^-1 eller konsekutiva utspädningar 10^-2, 10^-3 etc, mitt i ett standardkonto agarplatta.

-Fördela provet jämnt med Drigalski-spatel eller L-formad glasstång. Låt stå i 10 minuter.

-Omvända plattor och inkubera i aerobios vid 37 ° C i 24 till 48 timmar.

-Fortsätt att räkna kolonierna, välj de plattorna som ligger inom intervallet 20-250 CFU.

-Beräkning av UFC

Att beräkna utspädningsfaktorn, som är det omvända gäller. Numret är avrundet till 2 signifikanta siffror (avrundning enligt den tredje siffran) och uttrycks i bas 10-effekt. Om exempelvis 224 CFU räknas i provet utan utspädning (10^-1), 22 x 10 rapporteras¹  UFC, men om siffran var 225 rapporteras 23 x 10¹ UFC.

Nu, om du räknar 199 CFU i utspädning 10^-3, 20 x 10 kommer att rapporteras⁴ UFC, men om 153 CFU räknas i samma utspädning kommer 15 x 10 att rapporteras⁴ UFC.

Kvalitetskontroll

Standardantalet odlingsmedium kan utvärderas med användning av kända certifierade stammar, såsom: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Bacillus subtilis ATCC 6633, Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Shigella flexneri ATCC 12022.

Om odlingsmediet är i optimala förhållanden förväntas tillfredsställande tillväxt i samtliga fall, med undantag för L. fermentum som kan ha en regelbunden prestanda.

För att bedöma steriliteten hos odlingsmediet bör en eller två plattor av varje beredd sats (oinokulerad) inkuberas vid 37 ° C i aerobios i 24 timmar. Vid slutet av denna tid bör ingen tillväxt eller färgförändring av mediet observeras..

begränsningar

-Smält inte agar mer än en gång.

-Det beredda mediet kan vara upp till 3 månader så länge det hålls i kylskåp och skyddas mot ljus.

-Detta medium är inte lämpligt för krävande mikroorganismer eller anaerober.

referenser

1. National Administration of Medicines Food and Medical Technology (ANMAT). Mikrobiologisk analys av livsmedel, officiell analysmetodik, indikatormikroorganismer. 2014 Volym 3. Tillgänglig på: anmat.gov.ar
2. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories, S.A. Plate Count Agar. 2009. Tillgänglig på: http://f-soria.es
3. Laboratorier Conda Pronadisa. Agar för standardmetoder (PCA) enligt APHA och ISO 4833. Tillgänglig på: condalab.com
4. Laboratorier Britania. Att räkna på agarplattan. 2015. Finns på: britanialab.com
5. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B och Velázquez O. 2009. Tekniker för mikrobiologisk analys av livsmedel. Andra ed. Kemiska fakulteten, UNAM. Mexiko. Finns på: depa.fquim.unam