Agar CLED grund, användningar och förberedelser



den CLED agar (Cystine-Lactose-Electrolytes-Deficient) är ett differentiellt fast odlingsmedium som används för diagnos av urinvägsinfektioner. Sammansättningen av odlingsmediet är utformat för god tillväxt av urinpatogener och är idealisk för kvantifiering av kolonidannande enheter (CFU).

CLED-odlingsmediet är icke-selektivt, eftersom gramnegativa och även gram-positiva mikroorganismer kan växa i den. Men detta är inte ett problem, eftersom de flesta urinvägsinfektioner orsakas av en enda typ av mikroorganismer.

Vid polymikrobiella infektioner kan 2 eller 3 olika bakterier erhållas, men det är mycket sällsynt och det mesta är det förorenade proverna.

Bland de gramnegativa bakterierna som kan växa i detta medium är bacillerna tillhör familjen Enterobacteriaceae och andra enteriska baciller, uropatogenerna isoleras oftast i urinprover, följande: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, bland annat.

På samma sätt är bland de Gram-positiva bakterierna som kan växa i detta medium Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp och de kan till och med växa jäst, som komplexet Candida albicans.

På grund av mediets kemiska sammansättning tillåter emellertid inte tillväxten av några krävande genitourära patogener, såsom Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, bland annat.

index

  • 1 Stiftelsen för CLED agar
  • 2 Foundation of the CLED agar (Bevis)
  • 3 användningsområden
    • 3.1 Sår urinprover
    • 3.2 Tolkning
    • 3.3 Identifiering
  • 4 Framställning
  • 5 referenser

Stiftelsen för CLED-agar

CLED-odlingsmediet har som energikälla köttextrakt, kasein pankreatiskt hydrolysat och gelatinhydrolysat. De ger näringsämnena för utveckling av obehagliga bakterier.

Det innehåller också cystin, en aminosyra som möjliggör tillväxt av koliformer, som kan särskiljas med sin lilla storlek.

På samma sätt innehåller laktos fermenterbar kolhydrat, därför är detta medium differentiellt; Att kunna skilja de fermenterande bakterierna från den icke-fermenterande laktosen.

De fermenterande bakterierna vrider mediet i pH genom att producera syror, utvecklar gula kolonier, medan de icke-fermenterande bakterierna inte alstrar förändringar i mediet, därför tar de färgningen av den ursprungliga agaren, grön färg.

Fermenteringsreaktionen avslöjas tack vare närvaron av pH-indikatorn, vilken i detta medium är bromtymolblå.

Å andra sidan inhiberar lågelektrolytkoncentrationen av mediet den typiska invasiva tillväxten av släktet Proteus, kallad swarming effekt. Detta skapar en fördel jämfört med andra medel, så att räkningen av CFU, inklusive om släktet Proteus är närvarande.

Den låga koncentrationen av elektrolyter hämmar emellertid tillväxten hos vissa arter av släktet Shigella, att detta är en nackdel med hänsyn till andra medel.

Basen av CLED-agar (Bevis)

Det finns en variant eller modifiering av detta medium gjord av Bevis, som införlivade den ursprungliga fuchsinsyrakompositionen (Andrade-indikatorn) i den ursprungliga kompositionen. Det verkar tillsammans med bromtymolblått för att differentiera jäsning från icke-fermenterande bakterier.

Skillnaden mellan det konventionella och det modifierade mediet är den färg som antagits av kolonierna. När det gäller de laktosgerande bakterierna, får kolonierna en rödaktig orange färg med en rosa eller röd halo, medan de icke-fermenterade är blågrått..

tillämpningar

CLED agar används exklusivt för såning av urinprover. Användningen av detta medium är speciellt vanligt i europeiska laboratorier, medan det i Amerika används mindre.

Samlingen av provet måste uppfylla vissa parametrar för att få tillförlitliga resultat, inklusive:

  • Tar inte antibiotika innan provet tas.
  • Ta urinen företrädesvis från morgonens första timme, eftersom den är mer koncentrerad när det inte går att ta prov genom invasiva metoder.
  • Tvätta genitalen noga innan du tar provet.
  • Kassera den första urinflödet och placera sedan behållaren.
  • Samla mellan 25 och 30 ml urinen i sterila märkta behållare.
  • Ta omedelbart till laboratoriet omgivet av is.
  • Det måste behandlas före 2 timmars utsläpp eller kylas vid 4 ° C i högst 24 timmar.

Sår urinprover

Urinprovet måste spädas 1:50.

För utspädning placera 0,5 ml patientens urin och späd med 24,5 ml steril fysiologisk lösning.

Mät 0,1 ml av den utspädda urinen och såga per yta med en drigalski-spatel på CLED-mediet. Detta är såddmetoden som anges för att räkna kolonier. Det är därför det används i urinprover, eftersom resultaten måste uttryckas i CFU / ml.

För kvantifiering av de erhållna kolonierna, fortsätt enligt följande: räkna kolonies kolonier och multiplicera med 10 och därefter med 50. På så sätt får du mängden CFU / ml urin.

tolkning

Att räkna över 100 000 CFU / ml-Indica urininfektion

Räknar under 1000 CFU / ml - Ingen infektion

Att räkna mellan 1000-10 000 CFU / ml -Dubtful, eventuell förorening, upprepa provtagning.

identifiering

Kolonierna som odlas på CLED-agar bör göras ett gram och beroende på mikroorganismens morpotypintegrerande egenskaper utförs en viss subkultur.

Om det till exempel är en Gram-negativ bacillus så kommer det att såas på en MacConkey-agar, där jäsningen eller inte av laktosen är bekräftad. Dessutom är en näringsrik agar bunden för att utföra oxidas-testet.

Om Gram + kocker avslöjande kan subkultiveras i salt mannitol agar och näringsagar. I det senare utföres katalastestet. Slutligen, om jäst observeras, kommer det att såas på en Sabouraud agar.

Många laboratorier undviker användningen av CLED-mediet och föredrar att bara använda blodagar, MacConkey och näringsagar för att så urinproverna.

beredning

I en flaska med en liter destillerat vatten löses 36,2 gr pulveriserad CLED-agar. Efter 5 minuters vila, värm den resuspenderade agaren, blanda konstant tills den kokar i 1 minut.

Sterilisera därefter vid 121 ° C i 15 minuter i autoklaven. När tiden är avslutad avlägsnas den från autoklaven och får svalna tills den når en temperatur av 45 ° C. Därefter tjänstgjorde mellan 15-20 ml i varje steril petriskål.

Proceduren för betjäning av plattorna måste utföras inuti en laminär flödesskåp eller framför Bunsen-brännaren för att undvika förorening.

Plåtar serveras får stelna, beställas i en platthållare inverterad och förvaras i kylskåp (2-8 ° C) tills användning.

Det slutliga pH-värdet i det framställda mediet bör vara 7,3 ± 0,2.

referenser

  1. Rekommendationer för mikrobiologisk diagnos av urinvägsinfektion. chil. infectol.  2001; 18 (1): 57-63. Finns på: scielo.org.
  2. Panchi J. Identifiering av det mikrobiella medlet som orsakar urininfektioner hos interna patienter som genomgår blåskateterisering. 2016. Grundutbildning för att ansöka om titeln Licentiate in Clinical Laboratory. Tekniska universitetet i Ambato. Ecuador.
  3. Laboratorier Britania. Half CLED. Finns på: britanialab.com.
  4. Renylab Laboratories Anvisningar för användning, CLED Agar. 2013 Tillgänglig på: www.renylab.ind.br.
  5. Cultimed Laboratories Grundläggande handbok för mikrobiologi. Finns på: ictsl.net.
  6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. CLED-agaralternativet i urinkulturrutin. En prospektiv och jämförande utvärdering. Diagnostisk mikrobiolinfektionsdis. 1992; 15 (4): 287-90.
  7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktisk klinisk mikrobiologi. Universitetet i Cadiz, 2: a upplagan. UCA Publications Service.