Simmons citrat-agarfundament, beredning och användning



den Simmons Citrate agar Det är ett fast medium som används som ett biokemiskt test för att identifiera mikroorganismer, särskilt gramnegativa baciller. Det ursprungliga mediet skapades av Koser 1923.

Kosers citratmedium bestod av en buljong innehållande natriumfosfat, ammoniumfosfat, monokaliumfosfat, magnesiumsulfat och natriumcitrat..

Som det kan ses är den enda kolkällan i mediet citrat och kväve är ammoniumfosfat, proteiner och kolhydrater utesluts som en källa till dessa element, de är vanligtvis närvarande i andra medier..

Därför kan bakterien som inokuleras i det mediet endast reproduceras om den kan ta citratkolven. Testet var positivt om det fanns grumlighet i mediet, men det hade nackdelen att icke-specifik turbiditet kunde uppstå.

Detta problem löstes genom att Simmons tillsatte agar och bromtymolblått till Kosers ursprungliga formel. Även om principen är densamma tolkas den annorlunda.

index

  • 1 Stiftelsen
    • 1.1 såddsläge
    • 1.2 Tolkning
  • 2 Framställning
  • 3 Använd
  • 4 Slutliga överväganden
    • 4.1 Inokulum
    • 4.2 utsäde
    • 4.3 Färgintensitet
  • 5 referenser

foundation

Vissa bakterier har förmågan att överleva i frånvaro av jäsning eller produktion av mjölksyra, som behöver energi genom användning av andra substrat. I detta test är den enda koldioxid som erbjuds citrat.

Bakterier som kan överleva under dessa förhållanden metaboliserar citrat snabbt genom ett alternativ till den traditionella vägen, med användning av tricarboxylsyracykeln eller citratfermenteringscykeln.

Katraten av citrat med bakterier innefattar en enzymatisk mekanism utan ingripande av koenzym A. Detta enzym är känt som citricas (citratoxaloacetat-lyas) eller citratdesmolas. Reaktionen kräver närvaron av en bivalent katjon, som i detta fall tillföres av magnesiumet.

Reaktionen alstrar oxaloacetat och pyruvat, som sedan ger upphov till organiska syror i mitten av ett alkaliskt pH bildat genom användning av kvävekällan. Dessa organiska syror används som en kolkälla som alstrar karbonater och bikarbonater, vilket vidare alkaliserar mediet.

Såningsläge

Simmons citratmedium bör lätt inokuleras i fiskstång med rak slinga eller nål och inkuberas i 24 timmar vid 35-37 ° C. Vid slutet av tiden observeras resultaten.

Sädning sker endast på agarets yta. Gör inte punktering.

tolkning

Om mediet är av ursprunglig färg (grön) och ingen synlig tillväxt är testet negativt, men om mediet ändras till blått, indikerar det att det finns alkaliska produkter som detekteras av pH-indikatorn. I detta fall är testet positivt.

Detta händer för att om bakterien använder kolet i citratet är det också kapabelt att ta kvävet i ammoniumfosfatet med vilket det släpper ut ammoniak, alkaliserar mediet.

Å andra sidan, om tillväxten av bakterierna observeras i mediet men ingen färgförändring bör testet också betraktas som positivt, eftersom om det finns tillväxt betyder det att bakterierna kunde använda citrat som kolkälla, även om det inte finns något pH-förändring för tillfället (ibland kan det ta).

Om det finns tvivel i tolkningen av den slutliga färgen kan den jämföras med ett rör av oinkopplat citrat.

beredning

Väg 24,2 gr av det dehydratiserade mediet för en liter vatten. Blanda och låt stå i 5 minuter ungefär. Avsluta upplösning av mediet genom upphettning i 1 eller 2 minuter, omröring ofta.

Servera 4 ml i provrör och autoklaver vid 121 ° C i 15 minuter. När du lämnar autoklaven lutar du med hjälp av ett stöd så att agar stelnar i form av en flöjt topp med liten klump eller botten och mer avfasning.

Det slutliga pH-värdet för citratmediet är 6,9 (grönt). Detta medium är mycket känsligt för pH-förändring.

Vid pH 6 eller under blir mediet gult. Denna färg observeras inte i testet med bakterier.

Och vid pH 7,6 eller högre övergår mediet till intensiv preussisk blå.

användning

Simmons citratagar används för identifiering av vissa mikroorganismer, särskilt baciller som tillhör familjen Enterobacteriaceae och andra glukos-icke-fermenterande baciller..

Slutliga överväganden

Simmons citratmedium är ett mycket känsligt test, eftersom falska positiva effekter kan erhållas om vissa fel görs.

Den vård som måste tas är följande:

inokulum

Gör inte en väldigt tjock eller laddad bakterieinoculum, eftersom det kan orsaka att en coppery gul färg utvecklas på planteringsplatsen, utan att påverka resten av mediet, men det kan leda till tron ​​att det finns tillväxt. Detsamma betyder inte att testet är positivt.

På samma sätt kan en tjock inokulum generera en falsk positiv, eftersom förformade organiska föreningar i cellväggarna hos döende bakterier kan frigöra tillräckligt med kol och kväve för att vrida pH-indikatorn.

Därför är idealet att plantera med hjälp av nålen istället för platinhandtaget, för att undvika att ta överflödigt material.

planterade

Å andra sidan är det viktigt att citrattestet är det första som inokuleras för att undvika att proteiner eller kolhydrater släpper från ett annat medium när biokemiska testbatterier planteras för identifiering av mikroorganismen i fråga..

Under dessa omständigheter är det möjligt att erhålla en falsk positiv, eftersom någon av dessa ämnen som införs av misstag kommer att metaboliseras och orsaka en förändring i pH.

Ett annat sätt att undvika dra av ämnen är att bränna handtaget bra och ta nytt inokulum mellan ett test och ett annat.

Försiktighet bör också vidtas när man rör kolonin för att utföra inokulatet, eftersom det borde undvikas att dra del av agar från den kultur som bakterierna kommer från, på grund av de tidigare förklarade.

I detta avseende rekommenderar Matsen, Sherris och Branson att späda inokulatet i en fysiologisk lösning före inokulering av citrattestet för att undvika överföring av andra kolkällor.

Färgintensitet

Det måste beaktas att intensiteten hos den färg som produceras när testet är positivt kan variera beroende på kommersiella huset.

Dessutom finns det mikroorganismer som testar positiva vid 24 timmar, men det finns andra stammar som kräver 48 timmar eller mer för att ge en förändring i pH.

referenser

  1. Mac Faddin J. (2003). Biokemiska tester för identifiering av bakterier av klinisk betydelse. Tredje ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnos av Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  4. BD Laboratories BBL Simmons Citrate Agar Slants. 2015. Finns på: bd.com
  5. Laboratorier Britania. Simmons citratagar. 2015. Finns på: britanialab.com
  6. Valtek Diagnostic Laboratories. Simmons citratagar. 2016. Tillgänglig på: andinamedica.com.