Agarchokladfundament, användning och förberedelse



den chokladagar det är ett fast, berikat, icke-selektivt och icke-differentiellt odlingsmedium. Den används främst för isolering av mikroorganismer som kräver näringstillsyn, även om det kan växa någon typ av bakterier.

Därför ökar användbarheten speciellt vid sådd av prover som normalt är sterila, såsom CSF och ledvätska. Även om det också ingår i de medel som valts för sådd av polymikrobiella prover, men i dessa fall är det nödvändigt att tillsätta antibiotika som hämmar den samtidiga floran.

Detta medium har en karakteristisk brun färg som mycket liknar choklad, det vill säga dess namn. Preparatet är mycket lik blodagar, endast i det här fallet måste blodet upphettas så att de röda blodkropparna sönderbryts.

Dess förberedelse, som blodagar, är mycket känslig, eftersom det lätt förorenas. Av denna anledning föredrar många laboratorier att förvärva detta medium redan förberedt av kommersiella hus som garanterar deras kvalitet.

index

  • 1 Stiftelsen
  • 2 användningar
    • 2.1 Chokladagar framställd med Columbia agar
    • 2.2 Chokladagar framställd med GC-basagar (för gonokocker)
    • 2.3 Chokladagar framställd med Müeller Hinton agar
    • 2.4 Chokladagar framställd med Thayer Martin agar
  • 3 Framställning
    • 3.1 Beräkningar
    • 3.2 Väga och lösa upp
    • 3,3 sterilisera
    • 3.4 Aggregation av blod
    • 3,5 Ett annat sätt att förbereda chokladagar utan att använda blod
  • 4 Kvalitetskontroll
  • 5 referenser

foundation

Detta medium består av en bas av agar rik på näringsämnen och uppvärmt blod. Hemolysen av röda blodkroppar ger faktor X (hemin) och faktor V (NAD) som är nödvändiga för tillväxten av vissa mikroorganismer, såsom släktet. Haemophilus. Det är också mycket användbart för isolering av Neisserias sp.

Liksom blodagar kan olika medier användas som basagar, beroende på behovet. Bland de använda medierna är hjärthjärta infusion och tryptikas soja agar, även om den mest rekommenderade är Columbia agar, Müeller Hinton, GC agar och Thayer Martin agar..

Vissa varianter av chokladagar innefattar ett kommersiellt tillgängligt berikat tillägg som heter Isovitalex eller Polivitex.

Dessa tillskott innehåller vitamin B12, L-glutamin, adenin, guanin-hydroklorid, p-aminobensoesyra, nikotinamid-adenin-dinukleotid (NAD), tiaminpyrofosfat, ferrinitrat, tiaminhydroklorid, cysteinhydroklorid, L-cystin och glukos.

Det är viktigt att notera att chokladagar är mer berikad än blodagar, men tillåter inte observation av hemolysmönster.

tillämpningar

Chokladagar framställd med Columbia agar

Detta medium innehåller kasein och hjärtpankreatisk digererad, digererad köttpeptid, natriumklorid, agar, jästextrakt och majsstärkelse. Det är också rikt på vitaminer, mineraler och essentiella aminosyror.

Denna bas med uppvärmt blod är idealiskt för isolering av bakterier av släktet Neisseria. Å andra sidan, om ett tillägg för Brucella tillsätts till mediet, kan ovannämnda mikroorganism isoleras. Resultatet förbättras med hästblod.

Chokladagar framställd med GC-basagar (för gonokocker)

Detta medium innehåller peptoner, majsstärkelse, monobasiska och dibasiska buffertar, natriumklorid och agar.

Flesta choklad agar presentationer kommersiellt beredda med denna bas och innehåller upphettades blod, men en syntetisk blandning av hemin och en kemisk tillägg av tillväxtfaktorer, vitaminer, mineraler, aminosyror, glukos och faktor V.

Chokladagar framställd med Müeller Hinton agar

Det används för att utföra det antimikrobiella mottaglighetstestet av krävande mikroorganismer, såsom Streptococcus pneumoniae med 5% uppvärmd ramblod.

Det tjänar också till primär isolering av Neisserias och Haemophilus, men i det speciella fallet av isolering av Haemophilus användningen av hästblod föredras, eftersom det är en rik källa till faktor X och V.

Å andra sidan, om provet som ska sådas kommer från ett icke sterilt område, rekommenderas tillsats av antibiotika att hämma den normala floran i området..

Exempel på respiratoriska prover där förekomsten av bakterier i släktet är misstänkt Haemophilus Bacitracin används för att hämma tillväxten av Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus och Saprophytic Neisseria.

I fallet med prover av könsorgan, där det misstänks Haemophilus ducreyi, har använts framgångsrikt chokladagar ställdes enligt följande: Mueller - Hinton-agar med 5% hästblod chocolatizada, 1% IsoVitaleX anrikning och 3 pg / ml vankomycin.

Chokladagar framställd med Thayer Martin agar

Detta medium är speciellt för isolering av Neisseria gonorrhoeae. Det måste innehålla antibiotika för att hämma den medföljande floran. Lambblod används.

beredning

Indikationerna för framställning av basagar som skall användas bör ses. De är på baksidan av paketet av dehydratiserat medium. De brukar beskriva hur mycket som bör vägas för att förbereda en liter kulturmedium.

I laboratoriet kan du förbereda den exakta mängd som behövs, det kan vara mer eller mindre än en liter.

beräkningar

En regel på tre är gjord för att beräkna hur mycket som ska vägas för att förbereda den volym som önskas. exempel:

Om det gäller 1 liter är det nödvändigt att väga 40 gr och laboratoriet kräver 800 ml, sägs det:

1000 ml -40 gr

800 ml - X

Formeln kommer att vara enligt följande:

X = 32 gr (belopp som väger för 800 ml).

Väg och lös upp

Vi fortsätter att väga det nödvändiga beloppet och placera det i en fiola med vatten.

Värm till måttlig värme och blanda försiktigt med rotationsrörelser tills det dehydratiserade mediet är helt löst och låt det koka i 1 minut.

sterilisera

Fiolen införs i autoklaven för att sterilisera mediet vid 121 ° C i 20 minuter.

Aggregerat av blod

När autoklaven lämnas lämnas den till vila tills medietemperaturen är ungefär mellan 56 och 70 ° C för att placera blodet och blanda tills mediet blir brun.

Om du ska lägga till tillskott, är det dags att göra det. Blanda därefter och servera 20 ml till varje steril petriskål.

Hela proceduren måste utföras i en laminär flödeskåp eller runt Bunsen brännaren.

Låt stå tills de stelnar och hålls inverterade i kylskåp.

Ett annat sätt att förbereda chokladagar utan att använda blod

Basmediet framställes såsom beskrivits ovan, det kommersiellt erhållna dehydrerade hemoglobinet löses och steriliseras i autoklaven.

Båda lösningarna får svalna till 50 ° C, gå med och tillsätt tillägget. Blanda i aseptiska förhållanden och servera sedan i sterila petriskålar.

Kvalitetskontroll

Det är viktigt att blodet placeras vid den angivna temperaturen, eftersom det är det ideala att lysera de röda blodkropparna och samtidigt upprätthålla den faktor V som är värmekänslig.

Det borde inte finnas några bubblor på agarets yta. Varje sats på 100 plattor bör inkuberas en eller två plattor i spisen vid 37 ° C i 24 timmar för att kontrollera dess sterilitet.

För bästa resultat ska chokladagar användas kort efter förberedelsen.

Kontrollbakteriestammar bör tas i laboratoriet för att utvärdera effektiviteten hos det nyligen framställda mediet för tillväxten av de viktigaste krävande mikroorganismerna av klinisk betydelse.

referenser

  1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktisk klinisk mikrobiologi. Universitetet i Cadiz, 2: a upplagan. UCA Publications Service.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnos av Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Panamericana S.A Redaktionell.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. (5: e upplagan). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
  4. Llanes R, Reyes A, Rodriguez C, Guzman D, Llop A. Feasibility på användning av det odlingsmedium baserat på agar GC-Biocen Microbiology Laboratory. Rev Cubana Med Trop,  2004; 56 (3): 237-238. Finns på: scielo.sld.
  5. Wikipedia bidragsgivare. Chokladagar. Wikipedia, den fria encyklopedin. 17 december 2018, 19:54 UTC. Tillgänglig på: en.wikipedia.org.