Agar BHI grund, förberedelse och användningsområden



den BHI agar agar eller Brain Heart Infusion medium är en närande fast kultur. På spanska hänvisar vi till det som hjärthjärta infusionsagar. Det är ett icke-selektivt odlingsmedium, vilket innebär att alla typer av grampositiva och gramnegativa bakterier kan utvecklas, liksom vissa jäst och mögel.

Den består av hjärna hjärta infusions nötkött, peptiskt hydrolysat av djurvävnader, pankreas kaseinhydrolysat, natriumklorid, glukos, dinatriumfosfat och agar.

Det bör noteras att BHI-agar är ett av de vanligaste odlingsmedierna i bakteriologilaboratorier. Det kan användas utan tillskott som primärkultur, subkultur av kolonier erhållna i andra selektiva medier eller för underhåll av stammar i laboratoriet.

Å andra sidan är det ett idealiskt medium som kan användas som bas vid framställning av berikade medier, såsom blodagar och chokladagar. Båda är idealiska för att isolera krävande mikroorganismer ur näringssynpunkt. Det måste emellertid beaktas att eftersom det innehåller glukos är det inte tillräckligt att observera hemolysens mönster.

På samma sätt kan BHI-agar användas för framställning av speciella medel för isolering av patogena mikroorganismer med svår tillväxt i vanliga medier, bland dem: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae och Histoplasma capsulatum.

Med antibiotikatillsatsen blir BHI-agar ett selektivt medium för isolering av svampar.

index

  • 1 Stiftelsen
  • 2 Framställning
    • 2.1 kilar
    • 2,2 tallrikar
    • 2.3 Framställning av blodagar
  • 3 användningsområden
    • 3.1 Använd utan tillsatser
    • 3.2 Som bas agar för beredning av andra medier
  • 4 Kvalitetskontroll
  • 5 referenser

foundation

Det är ett näringsrikt kulturmedium för att isolera måttligt krävande mikroorganismer, kunna öka sin anrikning med tillsats av blod och andra näringstillskott.

Det är ett icke-selektivt odlingsmedium, vilket möjliggör tillväxten av de flesta Gram-positiva och Gram-negativa bakterierna, liksom vissa svampar. Det kan emellertid bli selektivt med tillsats av antibiotika.

Mediet innehåller infusion av kalvhjärna och hjärta, peptidhydrolysat från djurvävnader och kaseinpankreatisk hydrolysat; alla dessa föreningar fungerar som källor till vitaminer, aminosyror, kväve och kol.

Glukos är ett kolhydrat som ger energi till mikroorganismer när de har fermenterat det. Medan natriumklorid och dinatriumfosfat upprätthåller den osmotiska jämvikten och ger ett pH nära neutralitet. Slutligen ger agaren den fasta konsistensen till mediet.

beredning

Väg 52 gram av dehydratiserat medium och lös upp i en liter destillerat vatten. Blanda blandningen till en värmekälla tills den kokar, omrör ofta under upplösningsprocessen.

Du kan förbereda kilar eller plattor av BHI-agar utan tillsatser.

lagerbockar

För framställning av beredningen kilar tjänar till att fylla halv av varje rör, lock och autoklaverades vid 121 ° C i 15 minuter, framväxande på en bas sängen tills fast material. Förvara sedan i kylskåp tills användning.

plattor

Den upplösta blandningen autoklaveras vid 121 ° C i 15 minuter, när den lämnar får den svalna till 50 ° C och 20 ml av mediet serveras i sterila petriskålar. De får stelna, invertera och lagra i kylskåp tills de används. Låt plattorna ta rumstemperatur före plantering.

Mediumets pH bör vara 7,4 ± 0,2.

Det oförberedda mediet är beige och beredda är ljust gult.

Framställning av blodagar

Efter sterilisering av mediet, kylning till en temperatur av omkring 45 till 50 ° C, tillsätt sedan blodet (50 ml), blanda försiktigt och tjänar till att homogenisera aseptiskt 20 ml i varje petriskål. Om bubblor bildas på plattan måste föras snabbt lågan på bubblorna för att eliminera dem.

På samma sätt kan speciella medier framställas genom tillsats av motsvarande additiv när blandningen når temperaturen 45 till 50 ° C.

Mediet är körsbärrött.

tillämpningar

Använd utan tillskott

BHI-agar utan tillsatser är användbar som primärkultur och för plantering av rena stammar av mikroorganismer som är medelstora eller måttligt krävande för senare identifiering.

Som en betyder ljus färg, är den idealisk för att titta på pigment och också inte innehåller störande substanser kan utföras på honom några biokemiska tester såsom oxidas och katalas, eller montera andra biokemiska tester från kolonier från denna agar.

På samma sätt används BHI-agar kilar i stor utsträckning för upprätthållandet av stammar för en bestämd tid i laboratoriet (bakterioteca).

Plattorna eller kilarna som planteras på ytan med bakteriestammar inkuberas vid 37 ° C i 24 till 48 timmar. Medan i svampar kommer temperaturen och inkubationstiden att bero på vilken typ av svamp som söks.

Som en bas agar för framställning av andra medier

Med denna bas kan beredas berikade och selektiva medier.

berikad

Dess huvudsakliga funktion är att tjäna som grund vid framställning av blodagar för rutinmässig användning i mikrobiologilaboratorier. Speciellt bidrar BHI-basen till isoleringen av stammar av Streptococcus sp. Emellertid har den nackdelen att inte vara lämplig för observation av hemolysmönster eftersom den innehåller glukos.

Det används också vid framställning av kanin eller hästblodagar för isolering av Haemophilus sp. För bättre resultat kan du lägga till en anrikningstillägg (IsoVitaleX).

Om proven kommer från andningsvägarna till agar kan bacitracin tillsättas för att hämma den åtföljande floran och öka sannolikheten för återhämtning av stammarna av Haemophilus sp.

Å andra sidan kan blodagar (lamm eller människa) framställas med telluritcystin för att isolera Corynebacterium diphtheriae. På samma sätt är det användbart att framställa kaninblodagar, med tillsats av cystin och glukos för isolering av Francisella tularensis.

Sädning av blodagarplattor görs genom utmattning och inkuberas vid 35-37 ° C i 24-48 timmar i mikroaerofil (5-10% CO)2).

selektiv

Detta medium med tillsats av antibiotika kan ersätta Sabouraud agar för isolering av svampar.

Kombinationen av BHI agar med kloramfenikol - gentamicin eller penicillin-, streptomycin och hästblod är idealisk för isolering av Histoplasmakapselatum.

Beroende på vilken mikroorganism som ska isoleras, rekommenderas inkubation vid 35-37 ° C eller vid rumstemperatur i aerobios. Ibland är inkubation nödvändig i båda temperaturområdena, med användning av 2 plattor för detta.

Vissa svampar gillar Trichophyton mentagrophytes De bör inkuberas vid rumstemperatur i upp till 7 dagar.

Kvalitetskontroll

Från varje tillverkat sats rekommenderas att inkubera 1 platta eller kil vid 37 ° C i 24 timmar och verifiera att det inte finns någon tillväxt; Särskilt viktigt vid framställning av blodagar, eftersom det är ett lätt förorenat medium.

Å andra sidan kan kvaliteten på mediet utvärderas genom att inokulera kända eller certifierade standardstammar och observera deras utveckling.

I den meningen att utvärdera BHI-agar utan tillsatser, stammar av Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 eller Candida albicans ATCC 10231. De inkuberas vid 37 ° C i aerobios i 24 till 48 timmar. I alla fall förväntas tillfredsställande tillväxt.

För att utvärdera blodagarplattorna, stammar av  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 eller Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533.

Bakteriestammar inkuberas vid 37 ° C i mikroaerofilicus under 24 timmar, medan svampen inkuberas vid rumstemperatur i en fuktig kammare i upp till 7 dagar. I alla fall förväntas tillfredsställande tillväxt.

referenser

  1. Laboratorier Britania. Hjärthjärta infusion Agar. 2015. Finns på: britanialab.com.
  2. BD Laboratories Brain Heart Infusion (BHI) Agar. 2013. Finns på: bd.com.
  3. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories, S.A. Hjärninfusionsagar. 2009.
  4. Neogen laboratorium. Hjärninfusionsagar. Finns på: foodafety.neogen.com
  5. Gil M. Agarblod: grund, användning och förberedelse. 2018. Tillgänglig på: lifeder.com.
  6. Wikipedia bidragsgivare. Hjärninfusion Wikipedia, den fria encyklopedin. 19 september 2018, 03:58 UTC. Tillgänglig på: wikipedia.org. Åtkomst till 2 mars 2019.
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnos av Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.