Baird Parker Agar grund, förberedelse och användning

den Baird Parker agar Det är ett fast, selektivt och differentiellt odlingsmedium. Det skapades 1962 för detektering och koagulaspositiv Staphylococcusräkning (Staphylococcus aureus).

Den består av kasein pankreatisk hydrolysat, kött extrakt, jästextrakt, litiumklorid, glycin, natriumpyruvat, kaliumtellurit, agar och äggulvemulsion.

Baird Parker agar är baserad på förmågan hos S. aureus att reducera tellurit och producera lecitinas. Båda egenskaperna alstrar en koloni med specifika egenskaper för denna art. Därför erbjuder den stor effektivitet vid detektering av denna mikroorganism.

De typiska kolonierna av S. aureus De är svarta eller mörkgråa, med en färglös gräns och en tydlig halo som omger dem, vilket skiljer sig från resten av mikroorganismerna. Denna patogen kan hittas i kliniska prov, vatten, kosmetika och råa eller kokta livsmedel.

Diagnos eller detektion är kritisk, på grund av sorten av patologier produceras som matförgiftning, skållade hud syndrom, toxisk chocksyndrom, abscesser, meningit, septikemi, endokardit, bland annat.

index

• 1 Stiftelsen
  • 1.1 Näringsförmåga
  • 1.2 Selektiv
  • 1.3 Differential
• 2 Framställning
  • 2.1 äggula emulsion
  • 2,2 kalium tellurit vid 1% vikt / volym
  • 2.3 Framställning av odlingsmediet
• 3 Använd
  • 3.1 Kliniska prov
  • 3.2 Matprover
  • 3.3 Vattenprover
• 4 Kvalitetskontroll
• 5 rekommendationer
• 6 referenser

foundation

Näringsrik kraft

Pancreatic kaseinhydrolysat, köttextrakt och jästextrakt är källor av näringsämnen, vitaminer och mineraler som behövs för den övergripande mikrobiell tillväxt, medan pyruvat och glycin är föreningar främjar specifika tillväxt Staphylococcus aureus.

selektiv

Baird Parker agar är selektiv eftersom den innehåller ämnen som hämmar tillväxten av den medföljande floran samtidigt som man främjar utvecklingen av S. aureus. De inhiberande föreningarna är litiumklorid och kaliumtellurit.

avvikelsen

Detta innebär att man kan differentiera S. aureus av resten av koagulas-negativa Staphylococci. S. aureus har förmågan att minska tellurit till svart metallfritt tellurium som bildar svarta eller mörkgråa kolonier.

På samma sätt ger äggulan substraten för att bevisa närvaron av enzymet lecitinas och lipas. S. aureus det är positivt lecitinas och därför kommer en klar halo att observeras runt kolonin, vilket indikerar att lecitinet hydrolyserades.

I detta avseende indikerar utseendet i denna agar av svarta eller mörkgråa kolonier som lyser med ljust halo runt närvaro av S. aureus. 

Om en fällningszon bildas är det vägledande att lipasaktivitet föreligger. Några stammar av S. aureus de är positiva lipas och andra negativa.

I händelse av att S. aureus Om lipasen är positiv observeras en ogenomskinlig zon runt den svarta eller mörkgråa kolonin, och sedan den klara haloen på grund av verkan av lecitinas..

Kolonier av andra bakterier än S. aureus kunna växa i detta medium kommer att utveckla färglösa eller bruna kolonier, utan halo runt.

Atypiska svarta kolonier kan också observeras med eller utan en färglös kant, men utan en klar halo. Dessa kolonier bör inte beaktas, de motsvarar inte S. aureus.

beredning

Äggula emulsion

Ta ett nytt kycklingägg, tvätta det bra och placera det 2 till 3 timmar i 70% alkohol. Därefter öppnar ägget aseptiskt och äggvita separeras noga från äggulan. Därefter tas 50 ml av äggula och blandas med 50 ml steril fysiologisk lösning.

Kaliumtellurit vid 1% vikt / volym

Vissa kommersiella hus säljer 1% kalium tellurit redo att användas. Det sättes till mediet innan mediet stelnar.

För att förbereda denna lösning i laboratoriet väger 1,0 g kaliumtitturit och löses upp i en del av vatten. Därefter fullbordas mängden vatten till 100 ml. Lösningen måste steriliseras genom filtreringsmetoden.

Framställning av odlingsmedium

Väg 60 g av dehydratiserat medium och lös upp i 940 ml destillerat vatten. Låt blandningen stå i vila i ca 5 till 10 minuter.

Applicera värme genom att omröra mediet ofta för att förbättra upplösningsprocessen. Låt koka i en minut. Sterilisera i autoklaven vid 121 ° C i 15 minuter.

Låt stå tills den når en temperatur av 45 ° C och tillsätt 50 ml äggula emulsionen och 10 ml 1% tellurit. Blanda väl och servera 15 till 20 ml på sterila petriskålar.

Låt solidisera, beställa inverterad i plaquers och förvara i kylskåp tills användning.

Det slutliga pH-värdet för det framställda mediet bör vara 6,8 ± 0,2.

Innan du planterar ett prov, vänta tills plattan tar omgivningstemperaturen. Sö plåtarna genom striering eller genom att såga på ytan med Drigalski spatel.

Färgen på det dehydratiserade mediet är lättbrun och färgen på det beredda mediet är ljust gult.

användning

Kliniska prov

Kliniska prover utsädes direkt genom utmatning av en del av materialet i ena änden av plattan och därifrån strömmar den genom utmattning. Inkubera i 24 till 48 timmar vid 35-37 ° C.

Matprover

Väg 10 g av livsmedelsprovet och homogenisera i 90 ml 0,1% peptonerat vatten, utspädningar framställs därifrån, om det behövs. Inokulera tallrikarna i triplikat med 0,3 ml av de beredda lösningarna och så på ytan med en Drigalski-spatel. Inkubera i 24 till 48 timmar vid 35-37 ° C.

Denna metod möjliggör att räkna de erhållna typiska kolonierna och är idealisk när närvaron av S. aureus över 10 CFU per g / ml prov.

Om du misstänker att mängden av S. aureus det är litet eller det finns mycket medföljande flora, föreslås att berika provet i tripticas sojebotna med 10% NaCl och 1% natriumpyruvat. Detta kommer att gynna tillväxten av S. aureus och kommer att hämma utvecklingen av den medföljande floran. Rör som är grumliga kommer att utsädes på Baird Parker agar.

Vattenprover

I ett vakuumfiltreringssystem och steriliseras 100 ml vatten filtreras och därefter avlägsnas 0,4 mikron mikroporöst membran med en steril klämma och placeras på en Baird Parker-platta. Inkubera i 24 till 48 timmar vid 35-37 ° C. Denna teknik möjliggör räkning av typiska kolonier av S. aureus.

Kvalitetskontroll

För att utvärdera kvaliteten på Baird Parker agar kan kända stammar användas, såsom Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 eller Proteus mirabilis ATCC 43071.

Vid stammar av S. aureus ATCC är känt för att minska tellurit, och de är positiva lipas och lecitinas. Därför måste det finnas en tillfredsställande utveckling och växa konvexa kolonier med svart centrum och färglös kant med en ogenomskinlig halo och en annan halo mer extern klar.

Å andra sidan, S. epidermidis dålig utveckling förväntas i detta medium, med gråbrun till svarta kolonier, ingen klar halo.

till E. coli och P. mirabilis Det förväntas vara helt eller delvis inhiberat. Vid växning kommer bruna kolonier att utvecklas utan ogenomskinlig zon eller klar halo.

rekommendationer

-Mediet bör inte upphettas efter tillsättning av tellurit och äggula.

-Framställningen av äggula emulsionen och dess tillsats i mediet är ett mycket sårbart föroreningssteg. Extremvård måste tas.

-Om det finns närvaro av typiska kolonier av S. aureus måste bekräftas genom montering av ett koagulastest till nämnda stam.

-Om det finns tveksamma resultat med koagulas, måste andra bekräftande prov monteras.

-Var försiktig så att du inte förvirrar närvaron av typiska kolonier av S. aureus med de atypiska kolonierna av svart färg.

referenser

1. Wikipedia bidragsgivare. Baird-Parker agar. Wikipedia, den fria encyklopedin. 15 mars 2017, 19:36 UTC. Tillgänglig på: wikipedia.org/ Åtkomst 18 februari 2019.
2. BD Laboratories. Baird Parker Agar. 2006. Tillgänglig på: bd.com
3. Laboratorier Britania. Baird Parker agarbas. 2015. Finns på: britanialab.com
4. Francisco Soria Melguizo Laboratories. 2009. Baird Parker Agar. Finns på: http://f-soria.es/Inform
5. Laboratorier Britania. Kalium tellurit. 2015. Finns på: britanialab.com
6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Carrying Staphylococcus aureus enterotoxigenisk typ A, i nasofaryngeala utpressningar i mathanterare. Rev Med Chile 2017; 145: 1559-1564
7. Venezuelansk standardförening 1292-89. (1989). Mat. Isolering och räkning Staphylococcus aureus. Finns i:sencamer.gob.ve