Voges-Proskauer teststiftelse, förberedelse och användning



den Voges-Proskauer test är ett biokemiskt test som används för att identifiera bakterier som tillhör familjen Enterobacteriaceae. Speciellt är det användbart att skilja stammar av Escherichia coli av Klebsiella och Enterobacter, bland annat.

Testet utförs i det flytande odlingsmediet som heter methyl red-Voges Proskauer, bättre känt av akronym RM / VP. Detta medium är sammansatt av buffrad polypepton, glukos, dikaliumfosfat och destillerat vatten.

Det nuvarande RM / VP-mediet är en modifiering av Clark och Lubs-mediet, som ursprungligen innehöll en lägre koncentration av peptoner och glukos. Därför producerades mindre vätejon, som erfordras för den positiva Voges-Proskauer-reaktionen.

Testet är baserat på mikroorganismens förmåga att använda glukos via butylenglykolvägen och bildar en neutral slutprodukt som kallas acetoin, i närvaro av syre och ett alkaliskt pH.

I RM / VP-mediet, förutom att kunna avslöja Voges-Proskauer-testet, kan det metylröda testet också avslöjas.

index

  • 1 Stiftelsen
    • 1.1 Grunden för Voges-Proskauer-testet
    • 1.2 Grund för utveckling av test och tolkning
  • 2 Framställning
    • 2,1 medium RM / VP
    • 2,2 Voges A Reagent
    • 2.3 Voges B Reagens
  • 3 Förfarande för Voges-Proskauer-testet
    • 3.1 Utveckling av testet
  • 4 Använd
  • 5 Kvalitetskontroll
  • 6 referenser

foundation

Grunden för Voges-Proskauer-testet

De pluripeptoner som finns närvarande i mediet ger näringskraven väsentliga för bakteriell tillväxt. För sin del är glukos huvudföreningen. Många bakterier har förmågan att metabolisera glukos och bilda pyruvsyra.

Pyruvinsyran är en mittenpunkt i glukosets metabolism och därifrån kan varje mikroorganism ta olika vägar. Vissa kommer att bilda blandade syror, såsom mjölksyra, ättiksyra, myrsyra och bärnstenssyra, och andra kommer att bilda neutrala produkter som 2,3-butandiol.

Voges-Proskauer-testet avslöjar mikroorganismernas förmåga att bilda acetylmetylkarbinol (aketoin), en mellanprodukt av 2,3-butandiol under aeroba förhållanden.

Acetoin reduceras och 2,3-butandiol form, men denna reaktion är reversibel, så om den oxiderade 2,3-butandiol acetoin bildas. Därför är syre väsentligt.

Dik Kaliumfosfat är bufferten som dämpar blandningen vid ett pH av 6,9 ± 0,2..

Grund för utveckling av test och tolkning

För att demonstrera reaktionen måste en utveckling utföras med användning av två reagenser (Barrit reagenser), känd som Voges A och Voges B.

Voges A är en 5% lösning av a-naftol, och Voges B är ett 40% kaliumhydroxidpreparat. Om kaliumhydroxid inte är tillgänglig kan den ersättas med 40% natriumhydroxid.

Α-naftol är en katalysator som ökar intensiteten i reaktionens färg, vilket gör testet mer känsligt. A-naftolen måste alltid tillsättas först, rör röret så att mediet kommer i kontakt med syre. Sålunda acetoin Föreliggande oxideras till diacetyl och 2,3-butandiol oxideras för att bilda acetoin, diacetyl passerar detta.

Således kommer a-naftol att binda till diacetyl, som i sin tur har kopplats till guanidinkärnan närvarande i aminosyraargininet, den senare kommer från pluripeptonerna.

Av sin del är kalium- eller natriumhydroxid ansvarig för att absorbera CO2 och reagera med peptonerna. Denna reaktion orsakar bildandet av en rosa-laxfärg, tydligt synlig efter att skakan rört sig mycket väl.

För att färgen ska ske omedelbart måste de korrekta mängderna diacetyl, pepton och a-naftol blandas. Om detta inte händer, låt röret vila i 15 minuter före tolkning.

Vanligtvis är testet positivt efter 2 till 5 minuter, då en svag rosa färg kan observeras. Om du lämnar vila i 30 minuter till 1 timme blir färgens intensitet maximal (djupröd).

Ett negativt test kommer att framgå när buljongen är gul. Efter 1 timme, om testet är negativt, kan en kopparfärg bildas som ett resultat av reaktionen av kaliumhydroxid på a-naftol.

beredning

Medium RM / VP

Väg 17 g av dehydratiserat odlingsmedium och lös upp i en liter destillerat vatten. Låt stå i 5 minuter. Värm tills koka för att lösa upp helt. Servera 3 till 4 ml i rör och sterilisera i autoklav vid 121 ° C i 15 minuter.

Det dehydratiserade odlingsmediet är beige och det framställda medlet är ljust gult.

Mediets slutliga pH är 6,9 ± 0,2.

Voges A Reagent

Väg 5 g a-naftol och lös upp i 50 ml etylalkohol (absolut). Fortsätt sedan tillsätta etylalkohol för att göra upp till 100 ml.

Reagens Voges B

Väg 40 g kaliumhydroxid och lös upp i 50 ml destillerat vatten i en bägare. Glaset ska placeras i ett kallvattenbad för att reglera temperaturen, eftersom vid beredningstiden stiger preparatet kraftigt.

Efter att lösningen är kall överförs den till en målad ballong och bringas upp till 100 ml med destillerat vatten.

Förfarande för Voges-Proskauer-testet

Att utföra testet Voges-Proskauer en av RM / VP-buljong ympas med mikroorganismen under studie, från en ren kultur av 18 till 24 timmar.

Inokulatet ska inte vara för tätt. Den inkuberas vid 35-37 ° C i 24 till 48 timmar, även om ibland inkubation är nödvändig under flera dagar. Cowan och Steel tror att 5 dagar är den minsta inkubationstiden som är nödvändig för att detektera alla positiva Voges-Proskauer (VP) arter av familjen Enterobacteriaceae.

Utveckling av testet

Separera en 1 ml alikvot i ett rör och utför utvecklingen enligt följande: Placera 12 droppar (0,6 ml) Voges A-reagens och 4 droppar (0,2 ml) Voges B. Blanda för att lufta och låt stå i 5 - 10 minuter innan du utför det. Om testet fortfarande är negativt, låt det stå och observera röret efter 30 minuter till 1 timme.

Utseendet på en rosa röd färg indikerar att Voges-Proskauer-reaktionen är positiv. Om mediet blir gult är reaktionen negativ.

Tillägget av utvecklarna i den angivna ordningen och kvantiteten är avgörande för att undvika falska negativ.

användning

Voges-Proskauer-testet är användbart för att skilja mellan stammar av E. coli som är VP-negativa, bland släktarna Klebsiella, Enterobacter, Serratia, bland andra, vilka är VP-positiva.

Kvalitetskontroll

Kontrollstammar kan användas för att testa kvaliteten på det beredda mediet. Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC 43071, Salmonella typhimurium och Enterobacter cloacae ATCC 13047.

De förväntade resultaten är positiva Voges-Proskauer-reaktioner endast för K. pneumoniae och E. cloacae. Resten ger negativa reaktioner.

referenser

  1. Laboratorier Britania. MR-VP Medium. 2015. Finns på: www.britanialab.com
  2. Microkit Laboratories M-Ident Voges Proskauer. 2014. Tillgänglig: http://www.medioscultivo.com
  3. Mac Faddin J. (2003). Biokemiska tester för identifiering av bakterier av klinisk betydelse. Tredje ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnos av Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  5. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan. Editorial Panamericana S.A. Argentina.