Foundation lactosado buljong, beredning och användning



den laktosbuljong Det är ett flytande odlingsmedium, icke-selektiva, som används främst som ett medel för pre-anrikning vid isolering av Salmonella-stammar från mikrobiologisk analys för att bearbetade livsmedel, mejeriprodukter eller vatten. Detta rekommenderas av Internationella kommissionen för mikrobiologiska specifikationer för livsmedel (ICMPF).

Mediet innehåller enzymatisk digestion av gelatin, köttxtrakt och laktos, ämnen som är nödvändiga för bakteriell tillväxt. Dessutom är laktos en fermenterbar kolhydrat, så vissa koliformer kan splittra den med gasproduktion.

Därför är laktosbuljong som rekommenderas av American Public Health Association (APHA) för presumtiv studie av den totala och fekala koliforma bakterier, kalla det ett utmärkt alternativ för att ersätta lauryl buljong sulfat tryptos standardtekniken most probable number (NMP ) som används för mikrobiologisk analys av livsmedelsprover, mjölk och ytvatten, grundvatten, rekreationsvatten, hushållsavloppsvatten och industriella.

index

  • 1 Stiftelsen
  • 2 Framställning
  • 3 användningsområden
    • 3.1 Förberikning
    • 3.2 Analys av totala och fekala koliformer
  • 4 Kvalitetskontroll av mediet
  • 5 referenser

foundation

För mikrobiologisk analys av några prover över pre-anrikning är det viktigt att återställa en specifik mikroorganism som kan vara i mycket små mängder eller under gynnsamma förhållanden som bryter genomförbarhet eller minimera.

Sådan är fallet med torra och bearbetade livsmedel, eventuellt förorenade med Salmonella sp. I dessa fall, om bakterierna är närvarande, har de lidit fysisk och kemisk misshandel under produktens produktionsprocess..

På sådant sätt att mikroorganismerna utsätts för negativa faktorer såsom dehydratisering, exponering för hämmande eller giftiga produkter, och överlappning som alstras av närvaron av andra bakterier i större mängd, bland andra.

På så sätt har laktosbuljongen en reparerande effekt på mikroorganismens skadade strukturer, vilket medför att den återhämtar och reproducerar på ett sådant sätt att det kan detekteras.

Likaså har laktosbuljongen förmågan att späda de hämmande substanserna som kan påverka dess livskraft, vilket möjliggör dess utveckling. Dessutom är näringsämnena för laktosbuljongen strategisk för att gynna tillväxten av Salmonella sp över andra mikroorganismer.

För den slutliga identifieringen måste den subkultiveras mot andra medel för slutgiltiga grödor.

Å andra sidan möjliggör mediets sammansättning också detektion av laktosjäsande mikroorganismer som producerar gas.

beredning

För att bereda en liter laktosbuljong väger 13 gram av det dehydratiserade mediet och löses upp i 1000 ml destillerat vatten.

För att hjälpa till att lösa upp mediet i vattnet kan du värma lösningen lite, men inte för mycket..

Gång homogena lösningen framställes på följande sätt: om buljongen användes för att söka efter koliforma bakterier, en kuggstång med provrör, som införes till en fermentationsröret Durham förbereder munnen ned.

Durham-röret är en mycket viktig detalj, eftersom den kommer att tillåta att detektera bildandet av gas, värdefulla data i sökandet efter koliformer.

När rören är färdiga fördelas 10 ml av laktosbuljongen in i dem, vilket måste vara tillräckligt för att täcka hela Durham-röret..

Om laktosbuljongen kommer att användas som en berikningsbuljong är det inte nödvändigt att placera ett Durham-fermenteringsrör. I detta fall krävs en större mängd medium (225 ml), som serveras i 500 ml flaskor, vid mun och med en termo-resistent skruvlock.

Därefter tas rören eller kolvarna till autoklaven vid 121 ° C i 15 minuter.

Mediet bör förbli vid ett slutligt pH av 6,9 ± 0,2 vid 25 ° C.

Vinerna förvaras i kylskåp tills de används.

Före användning måste buljongerna tempereras vid rumstemperatur.

Å andra sidan kan laktosbuljongen också framställas vid dubbel koncentration.

Vissa laboratorier lägger till bromkresol lila i laktosbuljongen som en pH-indikator för att visa rören där det har förekommit laktosjäsning genom färgförändringen. I detta fall tar buljongen en lila färg och om jäsningen blir gult.

tillämpningar

I mikrobiologilaboratorier används laktoserad buljong som ett relativt billigt medium som ger pålitliga och snabba resultat (24-48 timmar).

Det kan användas för analys av totala och fekala koliformer i vatten och mat eller som en berikningsbuljong för Salmonella.

Preenrichment

För-berikning är ett steg före berikningen av provet, vilket avsevärt förbättrar återhämtningen av bakterier av släktet Salmonella i bearbetade livsmedel.

För detta utsöndras provet av den fasta maten (25 gram) eller vätskan (25 ml) i 225 ml laktosbuljong och inkuberas i 24 till 48 timmar. Därefter subkultes selenitcystinbuljong eller tetrathionatbuljong i ett berikat medium. Sedan går det vidare till selektiva medier XLD och SS.

Analys av totala och fekala koliformer

Det är ett utmärkt medel som en indikator på fekal kontaminering.

Laktosbuljongen är därför idealisk för den presumtiva fasen av den koliforma studien med det mest sannolika talmetoden.

För prover som misstänks i vilken ett stort antal koliforma bakterier är lägre mängd därav (1 ml) inokulerades, medan för prover i vilka färre koliformer mer misstänkt provvolym (10 ml) ympas.

10 utspädningar görs för analysen-1, 10-2, 10-3, bilda ett 3-5 rörbatteri för varje använd koncentration.

Från varje utspädning sås samma volym till laktosbuljongerna.

Rören inkuberas i 24 timmar. De buljonger som är negativa inkuberas i 24 timmar mer.

Tolkningen av resultaten görs genom att observera två egenskaper: den första är närvaron eller frånvaron av grumlighet och eftersom detta medium inte innehåller en pH-indikator kommer det inte att bli någon färgförändring.

Den andra är produktionen eller inte av gas. Gassen är lätt demonstrerad i Durham-röret, genom utseendet av en eller flera luftbubblor inuti.

Det anses vara positivt om båda egenskaperna observeras, det vill säga turbiditet med gasproduktion. Positiva rör bör omplanteras i bekräftande media (buljong Brilliant Green 2% Bile och EC buljong).

Kvalitetskontroll av mediet

- Vid framställning av mediet är det viktigt att inte glömma att placera Durhams-rören om syftet med detsamma är studien av koliformer.

- Överhett inte mediet innan det steriliseras.

- Distribuera i provrör före sterilisering, aldrig efter.

- Använd inte om mediet har mer än 3 månaders förberedelse.

- Använd inte om du märker någon förändring av mediets vanliga egenskaper.

- Vid beredning av ett parti laktosbuljong, testa kvaliteten på det genom att plantera stammar som är kända som Escherichia coli, Enterobacter aerogenes , Citrobacter freundii och Klebsiella pneumoniae. De växer mycket bra med gasproduktion (positiv kontroll).

- Det kan också inkludera Pseudomonas aeruginosa, salmonella typhimurium eller Enterococcus faecalis, som växer bra, men utan gasproduktion (negativ kontroll).

- Det bör noteras att den ursprungliga färgen på det dehydratiserade mediet är beige och det för mediet framställt mycket tydligt och genomskinligt gult. Om det finns en förändring i färg eller utseende kan det bli en försämring av densamma.

referenser

  1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Biologi och miljömikrobiologi. (2013) 1: a upplagan. Universitetet i Cartagenas, Colombia.
  2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B och Velázquez O. (2009). Tekniker för mikrobiologisk analys av mat. Andra ed. Kemiska fakulteten, UNAM. Mexiko.
  3. Laboratorier Conda Pronadisa. 2017. Laktos-buljong-dubbelkoncentration (European Pharm.)
  4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Jämförelse av tekniker för utvinning av koliforma bakterier från sjösedimentet av Xochimilco, Mexiko. Rev. argent. Microbiol.  2013; 45 (3): 180-184. Finns på: scielo.org.
  5. Sotomayor F, V Villagra, Cristaldo G, Silva L, Ibanez L. Bestämning av mikrobiologisk kvalitet av vatten från artesiska avdelningar distrikt i Central, Cordillera och kommun Capital. Mem. Inst. Investig. Cienc. hälsa 2013; 11 (1): 5-14. Tillgänglig från: scielo.iics.