EG-buljongfundament, förberedelse och användning



den EG-buljong eller buljong Escherichia coli Det är ett selektivt flytande odlingsmedium. Detta medium rekommenderas med standardmetoderna för räkning av totala och fekala koliformer, med tekniken av det mest sannolika antalet (NMP) i vatten- och livsmedelsprover, där huvudagenten är den Escherichia coli.

EG-buljongen består av triptein, laktos, gallsalter, dikaliumfosfat, monokaliumfosfat, natriumklorid och vatten. Dess formel är strategiskt utformad för att gynna tillväxten av totala och fekala koliformer och förhindra utvecklingen av andra medföljande mikroorganismer.

Bakterien Escherichia coli är den huvudsakliga fekala koliformen närvarande som en förorening i vatten och livsmedelskällor, vilket orsakar viktiga gastrointestinala påverkan.

Det bör noteras att det finns många serotyper av Escherchia coli; bland dem kan vi nämna enterohemoragiska (EHEC), enteroinvasiva (EIEC), enteropatogena (EPEC), enterotoxigena (ETEC) och enteroaggregativa (EAEC).

Detta betyder att de har kapacitet att tillåta utvecklingen av dem alla, men utan att skilja mellan dem. För att göra detta måste ytterligare tester utföras.

Den mikrobiologiska undersökningen av vatten och mat med det mest sannolika antalet (NMP) för sökandet av totalt och fekala koliformer är ett protokoll som överensstämmer med flera faser. presumptiv fas, bekräftande fas och färdigställningsfas. EG-buljongen används i bekräftande fasen.

index

  • 1 Stiftelsen
    • 1,1 EG-buljong
    • 1,2 EC buljong modifierad med novobiocin
  • 2 Framställning
    • 2,1 EG buljong
    • 2,2 EC buljong modifierad med novobiocin
  • 3 Använd
    • 3.1 Analys av totala och fekala koliformer
  • 4 Kvalitetskontroll
  • 5 rekommendationer
  • 6 referenser

foundation

EG-buljong

EC-mediet är baserat på att tillhandahålla nödvändiga näringsämnen för optimal utveckling av total och fecal koliformer, där bakterien ingår Escherichia coli.

Dessa näringsämnen tillhandahålls av triptein, som är en utmärkt källa till peptider och aminosyror. Dessutom innehåller den även laktos, en fermenterbar kolhydrat som ger energi och gör det möjligt att visa om bakterierna producerar gas.

Å andra sidan innehåller mediet gallsalter som ger den selektiva karaktären, eftersom den hämmar tillväxten av Gram-positiva mikroorganismer som kan vara närvarande i provet..

På samma sätt fungerar dikaliumfosfat och monokaliumfosfat som ett pH-balanseringssystem. Detta system är nödvändigt, eftersom laktosen som finns i buljongen tenderar att sura mediet när det fermenteras av mikroorganismer, men detta kompenseras av fosfatsalter.

Dessa element är därför avgörande, eftersom den okontrollerade surheten kan påverka den önskade utvecklingen av de önskade mikroorganismerna.

För sin del stabiliserar natriumkloridmediet osmotiskt, medan vatten är lösningsmedlet av de lösta ämnena som är närvarande och ger vätskekonsistensen till mediet.

EG-buljong modifierad med novobiocin

Okrend och Rose skapade en mängd EG-buljong, kallad EG-buljong modifierad med novobiocin. Modifieringen bestod i reduktionen av koncentrationen av gallsalter och tillsatsen av 20 mg / dl novobiocin.

Denna modifiering gynnar återhämtningen av stammar av Escherichia coli enterohemorragisk (O157: H7).

Denna bakteriella serotyp orsakar svår hemorragisk kolit som kan orsaka hemolytiskt uremiskt syndrom (HUS); vilket i sin tur kan ge akut njursvikt, med en hög dödlighet som kan nå upp till 50% hos äldre.

På grund av den sjuklighet och mortalitet som årligen orsakas av denna bakterie på grund av konsumtionen av förorenad mat, rekommenderar USA: s avdelning för jordbruk (USDA) i stor utsträckning användningen av detta medel.

beredning

EG-buljong

Väg 37,4 g av det dehydratiserade mediet och lösa upp i 1 liter destillerat vatten. Blandningen bör lämnas att vila i 5 minuter. Därefter upplöses i en värmekälla ofta upplösning.

När det är löst, fördelas det i provrör som tidigare är konditionerat med ett Durham-rör inuti. Sterilisera i en autoklav vid 121 ° C i 15 minuter.

Mediet pH bör vara 6,9 ± 0,2. Färgen på det dehydratiserade mediet är beige och framställt är ljust gult.

Vinerna förvaras i kylskåp tills de används. Vid användningstid måste buljongerna ligga vid rumstemperatur.

Å andra sidan kan EG-buljongen också framställas vid dubbel koncentration.

EG-buljong modifierad med novobiocin

Väg 36,7 g av det dehydratiserade mediet och lösa upp i 1 liter vatten. Resten av beredningen är densamma som den som beskrivits ovan.

användning

Analys av totala och fekala koliformer

EG-buljongen är idealisk för den bekräftande fasen av studien av koliformer genom NMP-metoden, både i vattenprover, som i läkemedel och livsmedel.

Lazy grumliga och gasproducerande buljonger erhållna i presumptiva fasen bör återställas i 2% ljusgrön gallon och EG-buljong.

För totala koliformer inkuberas EG-buljongerna i aerobioser under 24 till 48 timmar vid 37 ° C och för fekala koliformer inkuberas de i aerobios i 24 till 48 timmar vid 44 ° C.

I båda fallen tolkas det på följande sätt: de grumliga rören med gasproduktion anses vara positiva. Om det inte finns någon gasproduktion om 24 timmar fortsätter inkubationen i upp till 48 timmar.

EC-positiva buljonger övergår till den fullständiga bekräftande fasen, som består av resning i selektiva medier, såsom Mac Conkey agar, EMB agar eller Endo agar..

Om den använda buljongen är EG modifierad med novobiocin rekommenderas de positiva rören att återgå på Mac Conkey agar med sorbitol.

Kvalitetskontroll

Kvalitetskontroll måste utföras på varje parti preparerat medium. Först måste steriliteten hos mediet utvärderas. I denna bemärkelse inkuberas en eller två buljonger utan ympning i aerobios i 24 timmar vid 37 ° C. Det förväntade resultatet är en transparent buljong, utan grumlighet eller färgförändring.

För det andra bör tillväxten av kända stammar utvärderas, för vilka följande bakterier kan användas: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

I samtliga fall förväntas en tillfredsställande mikrobiell utveckling, observera en grumlig buljong med gasproduktion för E. coli och utan gas för Salmonella.

Andra stammar som kan ingå i kontrollen är: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Dessa stammar måste vara fullständigt inhiberade.

rekommendationer

-Placeringen av Durham-rör är avgörande för studier av koliformer.

-Fördela mediet i provrören innan det steriliseras, aldrig efter.

-Använd inte om mediet har mer än 3 månaders förberedelse.

-Använd inte om det finns någon förändring i mediets vanliga egenskaper.

referenser

  1. Laboratorier Britania. EC Medium. 2015. Finns på: britanialab.com
  2. E. coli enterohemorragisk. Centrum för livsmedelssäkerhet och folkhälsa. 2010. Tillgänglig på: cfsph.iastate.edu
  3. Neogen Corporation. Medium EC. Finns på: foodafety.neogen.com
  4. Neogen. Medium EC modifierad med novobiocin. Finns på: foodafety.neogen.com
  5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, Castillo M. Detektion, isolering och karakterisering av Escherichia coli producent av Shiga-toxin från färskt nötkött från slaktbutiker i Concepción, provinsen Tucumán. Rev Microgol av Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Finns på: www.scielo.org.