Dela med sig:
Peptonvattenfundament, förberedelse och användning
den peptonada vatten Det är ett icke-selektivt flytande anrikningsmedium, som huvudsakligen används som utspädningsmedel för matprover eller andra material. Det betyder att från kemisk synvinkel är det mycket enkelt, innehåller pepton av kött, natriumklorid och vatten.
Det har ett visst näringsvärde, vilket gör det möjligt att berika provet. Om det finns misshandlade bakterier betyder det att det finns möjlighet att reparera lönsamheten. Det är särskilt användbart vid återvinning av bakterier som tillhör familjen Enterobacteriaceae.
Vid återvinning av salmonellas rekommenderas användningen av buffertpeptonada-vattenvarianter; Detta tjänar som ett medel för föranrikning av provet, i det här fallet innehåller det andra element såsom dinatriumfosfat och dikaliumfosfat.
Normalt pepton vatten framställes vid neutralt pH, men andra varianter vid behov pH är 8,5 ± 0,2 (alkaliskt), eftersom bakterien är avsedd att isolera alkalofila, såsom Vibrio cholerae.
Å andra sidan kan detta medium användas som ett basmedium för kolhydratjäsningstest.
index
- 1 Stiftelsen
- 2 Framställning
- 2.1 Hemberedning (icke-kommersiell)
- 2.2 Framställning med kommersiellt medium
- 2.3 Förberedelser för jäsningstester
- 2.4 Andra varianter av peptonada vatten
- 3 Använd
- 3.1 pallprover
- 3.2 Matprover
- 4 Kvalitetskontroll
- 5 begränsningar
- 6 referenser
foundation
Peptoner ger de näringsämnen som krävs för bakteriell utveckling, speciellt kväve och kortkedjiga aminosyror, medan natriumklorid upprätthåller osmotisk balans.
Dessutom tillåter mediet att sprida, homogenisera och reparera bakterieceller som har skadats av industriella processer..
Som utspädningsmedel är det idealiskt att effektivt ersätta den fysiologiska lösningen (SSF) eller fosfatbufferten (PBS).
Bakteriell tillväxt är uppenbar genom att observera grumligheten av den.
beredning
Hemlagad förberedelse (icke-kommersiell)
Väg 1 g pepton och 8,5 g natriumklorid, lös upp i 1 liter destillerat vatten. PH bör justeras till 7,0. För detta kan du använda 1 N natriumklorid.
Framställning med användning av kommersiellt medium
Väg 15 g av det dehydratiserade mediet och lös upp i en liter destillerat vatten. Homogenisera blandningen. Om nödvändigt kokas blandningen i 1 minut för att hjälpa total upplösning. Servera i 100 ml flaskor eller i 10 ml rör efter behov. Autoklaver vid 121 ° C i 15 minuter.
Kyl och använd eller förvara i kylskåp. Det slutliga pH-värdet i mediet är 7,2 ± 0,2.
Färgen på det dehydratiserade mediet är lätt beige och framställt är ljust, bärnstensfärgat.
Förberedelse för jäsningstester
Beredningen ovan -Innan steriliseras måste läggas kolhydrat till en slutlig koncentration av 1%, mer Andrade indikator (syra fuchsin) eller fenolrött (0,018 g / L). En Durham-klocka för observation av gasbildning bör placeras på rören.
Andra peptonada vattenvarianter
-Peptonvatten buffrad eller buffrad
Det innehåller kasein-enzymatiskt hydrolysat, natriumklorid, kaliumdihydrogenfosfat och natriumvätefosfatdodekahydrat. Det slutliga pH-värdet är 7,0 ± 0,2.
För beredningen väger 20 g av dehydratiserat medium och löses upp i 1 liter destillerat vatten. Låt stå i 5 minuter ungefär. Värm i 1 minut tills den är helt upplöst.
Häll i lämpliga flaskor efter behov. Sterilisera med autoklaven vid 121 ° C i 15 minuter.
-Alkaliskt peptonerat vatten
Väg 25 g av dehydratiserat medium och lös upp i 1 liter vatten. Fortsätt som beskrivet ovan. PH varierar från 8,3 till 8,7.
användning
Inokulatet görs genom att placera provet direkt.
Det används för att späda proven, speciellt när man misstänker att det kan vara skadade bakterier. Vanligtvis är utspädningarna 1:10 och 1: 100.
Inkubera i 24 timmar i aerobios vid 35-37 ° C.
Pallprover
För pallprover som letar efter Salmonella rekommenderas användningen av buffrad eller buffrat vatten som ett berikningsmedium..
Gör så här genom att göra följande:
Om avföringen bildas, ta 1 g prov. Om de är flytande ska du ta 1 ml avföring och suspendera i ett rör med 10 ml buffrad peptonerat vatten. När det gäller rektala swabs, töm det material som finns i swaben i röret med buffert peptonerat vatten.
Blanda och homogenisera provet i alla fall mycket bra.
Inkubera vid 37 ° C under 18-24 timmar. Därefter subodlas i en anrikningsbuljong som selenit cystin buljong eller tetrationate vid 37 ° C under 18-24 timmar. Slutligen odla i selektiva medier för Salmonella, såsom SS agar, XLD agar, Hektoen agar, bland andra.
Matprover
Den pepton vatten används som anrikningsmedium eller så enkelt spädningsmedel, men om Salmonella-arter söks används som en pre-anrikning, såsom redan beskrivits.
I livsmedel fortsätt enligt följande:
För fasta livsmedel väger 25 g av provet och för flytande livsmedel mäter 25 ml av det. Placera del i flaskor innehållande 225 ml peptonerat vatten. Blanda och homogenisera provet.
Om man misstänker att den mikrobiella belastningen med hög kan göras decimala serieutspädningar eller för att underlätta räkningen av kolonibildande enheter (CFU).
Antalet utspädningar beror på typen av prov och den analytiska erfarenheten.
Om det tvärtom är misstänkt att den mikrobiella belastningen är mycket låg, är det inte nödvändigt att göra utspädningar. Därefter subcultivate i selektiva medier.
När det gäller mat från havet, som fisk och skaldjur, bland annat, på jakt efter Vibrio cholerae eller andra Vibrio-arter, bör peptonvatten justerat till pH 8,5 (alkaliskt peptonerat vatten) användas.
Kvalitetskontroll
Från varje tillverkat parti bör en till två rör inkuberas utan ympning i 24 timmar i aerobios vid 37 ° C. Vid slutet av tiden bör ingen grumlighet eller färgförändring observeras.
Även välkända kontrollstammar kan användas för att utvärdera deras effektivitet:
För detta kan följande bakteriestammar användas: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.
I samtliga fall förväntas en tillfredsställande mikrobiell utveckling, vilket observeras av medels turbiditet.
begränsningar
-Det dehydratiserade mediet är mycket hygroskopiskt, så det bör hållas borta från fukt.
-Mediet bör inte användas om någon typ av försämring observeras.
-Det dehydratiserade odlingsmediet bör lagras mellan 10 och 35 ° C
-Det beredda mediet bör hållas kylt (2-8 ° C).
referenser
- Camacho A, Giles M, Ortegon A, Palao M, Serrano B och O. Velazquez Tekniker för Mikrobiologiska Food Analysis. 2009, 2: e upplagan. Kemiska fakulteten, UNAM. Mexiko. Versionshanteraren Manuals och dokument (AmyD) av fakulteten för kemi, UNAM 1. Finns på: http://depa.fquim.unam.mx
- Laboratorier Britania. Buffert peptonada vatten. 2015. Finns på: britanialab.com
- Neogen Laboratories Peptonvatten. Finns på: foodafety.neogen.com
- Laboratorier Britania. Peptonvatten. 2015. Finns på: britanialab.com
- Merck Laboratories Buffertpeptonvatten. Finns på: merckmillipore.com
- Laboratorier Conda Pronadisa. Alkaliskt peptonerat vatten. Finns på: condalab.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnos av Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.