Halv SIM-grund, förberedelse och användning



den halv SIM Det är en halvfast och differentiell agar, speciellt utformad för att hjälpa identifieringen av vissa bakterier, främst av familjen Enterobacteriaceae. Den består av triptein, pepton, järnsulfat, ammoniumsulfat, natriumtiosulfat och agar.

Detta medium möjliggör utförandet av tre viktiga test: produktionen av vätesulfid (H2S), indolbildning och motilitet, följaktligen akronym SIM. På grund av sin stora användbarhet kan det inte saknas i ett bakteriologilaboratorium.

Till skillnad från andra medier måste detta vara halvfast så att rörelsekapaciteten hos vissa bakterier är detekterbar. I detta avseende fungerar detta test mycket bra för Enterobacteriaceae, men inte i gramnegativa, icke-fermenterande baciller, där det föredras att använda andra metoder, såsom till exempel den väntande droppen.

SIM-mediet tillåter att skilja vissa specifika egenskaper som karakteriserar vissa bakterier i förhållande till andra. Till exempel Escherichia coli det utmärks av att vara H2S (-), Indol (+) och motilitet (+), medan Proteus mirabilis det är H2S (+), indol (-), motilitet (+).

index

  • 1 Stiftelsen
    • 1.1 Strömkälla
    • 1.2 Framställning av vätesulfid
    • 1.3 Indolbildning
    • 1.4 Motilitet
  • 2 Framställning
    • 2,1 halv SIM
    • 2.2 Kovacs reagens
    • 2,3 Erlich-reagens
  • 3 användningsområden
    • 3.1 sådd
  • 4 Kvalitetskontroll
  • 5 begränsningar
  • 6 referenser

foundation

Det är ett kulturmedium som anses vara skillnad, eftersom dess användning klarar av att skilja mellan mikroorganismer som kan producera vätesulfid från de som inte gör det. framhäver också de som bildar indol från tryptofanen hos de som inte bildar den och äntligen skiljer motilen från de immobila bakterierna.

Strömkälla

Som något odlingsmedium har det element som tillhandahåller nödvändiga näringsämnen så att icke-krävande mikroorganismer kan utvecklas. Dessa element representeras av peptonerna och tripteína.

Utvecklingen av mikroorganismen i miljön är väsentlig för att kunna observera närvaron eller frånvaron av de egenskaper som utvärderas av detta medium.

Produktion av vätesulfid

Bokstaven S i akronym SIM avser produktion av vätesulfid (H2S). Bakterier som kan bilda vätesulfid tar svavel av natriumtiosulfat.

När H är formad2S - färglösa gaser - detta reagerar med järnsaltet närvarande i mediet, vilket bildar järnsulfid, tydligt synlig (svart fällning). Bakterier som inte bildar H2S, lämna mitten av originalfärgen (beige).

Närvaron av den svarta fällningen kan hindra tolkningen av rörligheten. Det är emellertid känt att majoriteten av H-producerande enterobakterier2S är positiv motilitet, såsom Salmonella, Proteus och Citrobacter. Dessutom föreslår den svarta fällningen som täcker nästan hela mediet, positiv motilitet.

Indol träning

Den andra bokstaven i akronym SIM är "I", som representerar bildandet av indol.

I den meningen uppfyller tripteína, förutom att vara en näringsämne, en annan grundläggande funktion. Denna pepton är rik på en aminosyra som kallas tryptofan, därför kan den visa bakterier som producerar tryptofanas.

Detta enzym är ansvarigt för klipning av aminosyran tryptofan, med den resulterande bildningen av indol (färglös substans), pyruvsyra och ammonium..

Det är därför, för att visa denna reaktion, det är nödvändigt att lägga till en avslöjande substans (Ehrlich reagens eller Kovac reagens). Antingen reagerar man med indolen och bildar en ringformad rödfuksiämne på agarets yta. Om fuchsia-ringen visas indole-testet tolkas som positivt.

Bakterier som inte har detta enzym, kommer inte att bilda ringen och tolkas som ett negativt indolprov.

Det är viktigt att påpeka att indolprovet borde vara det sista som tolkas, eftersom reagensen tillsätts blir mediet molnt vilket gör det svårt att visualisera motiliteten.

motilitet

Slutligen betyder bokstaven "M" av ordet SIM motilitet. För att kunna utvärdera motiliteten är detta medium strategiskt halvfast eftersom den här egenskapen är nödvändig för att kunna observera huruvida det finns bakteriell rörelse eller ej. De bakterier som har flagella är de som ger detta positiva test.

Ett positivt test kommer att framgå när grumlighet observeras, både i den ursprungliga inokulaten och runt den. Samtidigt utvecklas icke-mobila bakterier i den ursprungliga inokulationsbanan.

beredning

Halv SIM

Väg 30 g av dehydratiserat medium och lös upp i en liter destillerat vatten. Blandningen lämnas stå i 5 minuter och upphettas därefter till kokning, omröring ofta tills den är fullständigt upplöst..

Fördela blandningen i provrör med bomullslock och autoklav vid 121 ° C i 15 minuter. Ta bort rörstället från autoklaven och låt det stelna i upprätt läge så att mediet är i form av ett block..

För förvaring hålls den i kylskåpet tills den används. Det beredda mediet måste ha ett slutligt pH av 7,3 ± 0,2.

Vid tidpunkten för inokulering av mediet måste det vara vid rumstemperatur. Färgen på mediet är beige.

Kovacs reagens

Mät 150 ml amyl eller isoamyl eller butylalkohol. (Använd en av de tre nämnda).

Lös 10 g p-dimetylaminobensaldehyd. Därefter tillsätt långsamt 50 ml koncentrerad saltsyra.

Det reagens som är klart för användning är färglöst eller ljusgult. Det ska förvaras i en gult flaska och förvaras i kylskåp. Använd inte om det tar en mörkbrun färg; som indikerar att den är skadad. Detta reagens är föredraget vid hantering av enterobakterier.

Erlich-reagens

Väg 2 g p-dimetylaminobensaldehyd och lös upp i 190 ml absolut etylalkohol och blanda långsamt med 40 ml koncentrerad klorvätesyra. Håll Kovacs reagens på samma sätt. Ehrlich reagens används mer för icke-fermenterande och anaeroba bakterier.

tillämpningar

SIM-mediet används mycket i bakteriologilaboratorier. Det har som en fördel att i samma rör kan tre viktiga egenskaper observeras vid identifieringen av Enterobacteriaceae.

planterade

Det korrekta sättet att så detta medium är genom att använda nålen, med vilken en del av den rena kolonin som ska studeras tas och läggs in i mitten av mediet vertikalt. En enda dragkraft måste göras. Punkteringen ska inte nå botten av röret, det rätta är att täcka endast två tredjedelar av djupet.

Det är inte tillrådligt att upprepa inokulatet, eftersom detta kan leda till falska tolkningar av positiv motilitet. Det inokulerade mediet inkuberas i aerobios vid 37 ° C under 24 timmar.

Avgjorde den tid det observerades om det fanns eller inte var H-produktion2S och motilitet läses. Slutligen avslöjs indolen, vilket ger 3 till 4 droppar av Ehrlich eller Kovacs reagens, det blandas försiktigt och tolkas.

Kvalitetskontroll

Som en sterilitetskontroll inkuberas en eller två rör utan ympning i en ugn vid 37 ° C under 24 timmar. Det förväntas att efter denna tid blir det ingen tillväxt eller färgförändring.

Som kvalitetskontroll kan certifierade kända stammar användas, såsom: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

De förväntade resultaten är: Escherichia coli H2S-negativ, indol och positiv motilitet, Enterobacter aerogenes endast positiv motilitet, Salmonella typhimurium H2S och positiv motilitet, med negativ indol. Proteus vulgaris alla positiva, medan Klebsiella pneumoniae och Shigella sonnei alla negativa.

begränsningar

-Några stammar av Morganella morganii, bland andra stammar kan producera ett brunt pigment i detta medium på grund av produktionen av melanin, bör detta inte förväxlas med utfällningen av järnsulfid. I oerfarna proffs kan denna situation generera falska positiva effekter i tolkningen av H-testet2S.

-Starka aeroba bakterier växer bara på rörets yta, vilket gör det svårt att tolka motiliteten.

referenser

  1. BD Laboratories BBL SIM Medium. 2008. Tillgänglig på: bd.com
  2. Neogen Laboratories SIM-medium. Finns på: foodafety
  3. Difco Francisco Soria Melguizo. SIM-medium. 2009. Tillgänglig på: http://f-soria.es
  4. Brizuela-Lab Laboratory SIM-medium. Finns på: .brizuela-lab.com
  5. Laboratorier Britania. SIM-medium. 2015. Tillgänglig på: studyres.es/doc
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan. Editorial Panamericana S.A. Argentina.