MIO-medium grund, förberedelse och användning

den halv MIO är ett biokemiskt test som används för att identifiera bakteriearter som tillhör familjen Enterobacteriaceae. Det är ganska näringsrikt och består av glukos, jästextrakt, pepton, triptein, L-ornitinhydroklorid, bromkresolpulver och agar.

Betydelsen av dess akronym (MIO) beskriver varje parameter som kan observeras i detta medium; motilitet, indol och ornitin. Motilitet är mikroorganismens förmåga att röra sig genom närvaron av flagella. För att denna egenskap ska kunna observeras måste mediets konsistens vara halvfast, så beredningen har mindre mängd agar..

Indol produktionen bevisar närvaron av tryptofanasenzym verkar på aminosyran tryptofan, kräver användning av ett framkallningsreagens för synligt indolproduktion.

Slutligen bestämmer ornitin om bakterien är kapabel att dekarboxylera aminosyran, det vill säga om den har enzymet orinitindecarboxylas.

index

• 1 Stiftelsen
  • 1.1 Pepton, jästextrakt och triptein
  • 1.2 Motilitet
  • 1,3 glukos
  • 1,4 L-ornitin
  • 1,5 pH-indikator
• 2 sådd och utvecklingsteknik
• 3 Framställning
  • 3,1 MIO Medium
  • 3.2 Kovacs reagens (indol testutvecklare)
• 4 Använd
• 5 Kvalitetskontroll
• 6 referenser

foundation

Pepton, jästextrakt och triptein

Dessa element bidrar till näringsämnet i detta medium. De tjänar som en källa till näringsämnen och essentiella aminosyror för bakteriell utveckling.

Dessutom är triptein en källa till tryptofan för att bevisa närvaron av enzymet tryptofanas, vilket bryter ned tryptofan genom en reduktiv deaminering som frisätter indol, pyrodruvsyra, ammoniak och energi.

Indolen är färglös, så dess närvaro avslöjas genom tillsats fem droppar Ehrlich-reagens eller Kovacs, både med p-dimetylaminobensaldehyd.

Aldehydgruppen i denna förening reagerar med indol, vilket alstrar en ringformad fuchsia-röd produkt på agarytan.

Varje färgspår ska betraktas som positivt bevis. Testet bör läsas omedelbart, eftersom efter ett tag försämras färgen.

Å andra sidan bör detta test avslöjas efter att ha registrerat resultaten av motilitet och dekarboxylering av ornitin..

tolkning

Positivt test: bildande av en fuchsia-röd ring när man tillsätter Kovacs reagensdroppar.

Negativt test: det finns ingen ringbildning.

motilitet

Bakteriernas förmåga att röra sig kommer att bevisas om ett grumligt medium observeras eller om det finns en tjock tillväxtlinje som expanderar kring den inledande inokuleringen.

Ett negativt motilitetstest kommer att bevisas genom att observera en tunn tillväxtlinje, och runt omkring kommer det att vara utan tillväxt.

Det är viktigt att motiliteten läses innan man avslöjar indolen, eftersom tillsatsen av reagenset molnar hela mediet.

I mobila men långsamma bakterier är det svårt att visa sin rörlighet med detta medium. I detta fall rekommenderas att använda andra tester eller metoder, såsom motilitetsmediet eller droppfallsmetoden.

glukos

Glukos är det fermenterbara kolhydratet som förutom att tillhandahålla energi försurar mediet, en nödvändig förutsättning för dekarboxylering av aminosyrornitinet för att inträffa.

Gissningen av glukos bör alltid ske, baserat på principen att alla bakterier som tillhör familjen Enterobacteriaceae ferment glukos.

L-ornitin

Om bakterien producerar enzymet ornitindecarboxylas kan det verka när mediet har surgjorts genom fermentering av glukos.

Enzym ornitindecarboxylas verkar på karboxylgruppen i aminosyran som producerar en amin som kallas putresin som alkaliserar mediet igen.

Detta test bör läsas efter 24 timmars inkubation, för om du försöker läsa innan du kan feltolka testet med en falsk negativ.

Man måste komma ihåg att den första reaktionen som uppstår är fermenteringen av glukos, så att mediet blir gult i en inledningsfas (första 10 till 12 timmar). Om dekarboxyleringen av ornitin senare inträffar blir mediet lila.

Det är viktigt att tolka test dekarboxyleringen av ornitin innan avslöja indolen, eftersom tillsatsen av Kovacs reagens ändrar färg av mediet.

tolkning

Negativt test: medellång eller med gul bakgrund.

Positivt test: helt lila.

PH indikator

I detta fall används bromokresol lila; Den som ansvarar för att avslöja när det finns en pH-förändring i mitten. När det surgörs blir indikatorn gul och när alkaliseringen blir lila.

Frö och utvecklingsteknik

För att plantera MIO-mediet används en rak slinga eller nål och med den samlas en del av kolonin som skall studeras..

En djup punktering görs i MIO-mediet i en rak linje. Det är inte tillrådligt att utföra dubbel punktering, eftersom det kan ge en falsk motilitetsbild om punkteringarna inte utförs på samma plats.

Inkubera i 24 till 48 timmar vid 37 ° C i aerobios. Observera resultaten i denna ordning: motilitet, dekarboxylering av ornitin och slutligen avslöja indolen.

Det är lämpligt att aseptiskt ta 2 ml av mediet, överföra det till ett sterilt rör och utföra indolprovet där, så att om det är negativt kan resten av det ursprungliga röret inkuberas i 24 timmar för att avslöja indolen igen.

Utvecklingen av indol utföres på följande sätt: 3 till 5 droppar av Kovacs-reagenset tillsätts till MIO-mediet och omröres kraftigt. Det observeras om en fuchsia röd ring visas eller inte.

beredning

Halv MIO

Väg 31 gr MIO-medium och lös upp i en liter destillerat vatten.

Värm tills blandningen kokar i en minut, omrör ofta tills agar är helt upplöst. Fördela 4 ml av mediet i 13/100 provrör med bomullslock.

Sterilisera i en autoklav vid 121 ° C i 15 minuter. Avlägsna från autoklaven och låt den stå rakt i ett ställ, så att ett halvfast block bildas.

Förvaras i kylskåp 2-8 ° C. Låt temperamentet före plantering av bakteriestammen.

Färgen på det dehydratiserade mediet är beige och det för mediet framställt något lila opaliserande.

Det slutliga pH-värdet för det framställda mediet är 6,5 ± 0,2

Mediet blir gult med surt pH och är lila vid alkaliskt pH.

Kovacs reagens (indol testutvecklare)

Detta reagens framställes enligt följande:

150 ml amyl-, isoamyl- eller butylalkohol (vilken som helst av de tre) mäts. I det löses 10 g p-dimetylaminobensaldehyd. Därefter tillsättes långsamt 50 ml koncentrerad klorvätesyra.

Det beredda reagenset är färglöst eller ljusgult. Det ska förvaras i en gult flaska och förvaras i kylskåp. En mörkbrun färg visar sin försämring.

Även Kovacs-reagenset kan ersättas med Ehrlich-reagenset. Den senare, som är mer känsliga, är föredragen för att avslöja indol i bakterier som producerar det i små mängder, såsom i vissa icke-fermentativa gramnegativa baciller och vissa anaerober.

användning

Detta medium är ett test som kompletterar ett batteri av biokemiska tester för identifiering av bakterier som tillhör familjen Enterobacteriaceae.

De-karboxyleringsdata av ornitin tjänar till att differentiera Shigella sonnei, det ger positivt av Shigella boydii, Shigella flexneri och S. dysenterieae, som ger negativ.

Det skiljer också släktet Klebsiella, vilket ger negativ, släktet Enterobacter, där de flesta av dess arter är positiva.

Kvalitetskontroll

Varje gång en sats MIO-medium framställes kan ett kontrolltest utföras. För detta används kända eller certifierade stammar för att observera mediumets beteende.

De stammar som kan användas är Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes och Proteus mirabilis.

De förväntade resultaten är E. coli och M. morganii. Dan M: +, I: + och O: +.

Klebsiella pneumoniae ger alla negativa (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis och Enterobacter aerogenes dan M: + I: - och O: +.

referenser

1. Mac Faddin J. (2003). Biokemiska tester för identifiering av bakterier av klinisk betydelse. Tredje ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnos av Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
4. Laboratorier Britania. MIO Medio 2015. Tillgänglig på: britanialab.com
5. BD Laboratories BBL Motility Indole Ornithine (MIO) Medium. 2007. Tillgänglig på: bd.com
6. Valtek Laboratories Medium M.I.O. Motilitet, Indol, Ornitin. 2010. Tillgänglig på: andinamedica.com